NCI-H209人小细胞肺癌细胞源自人小细胞肺癌患者，具神经内分泌特性，贴壁生长，携带典型分子改变，是小细胞肺癌机制研究与抗肿瘤药物筛选的常用模型。​

NCI-H209人小细胞肺癌细胞

NCI-H209人小细胞肺癌细胞 是由美国国家癌症研究所（NCI）分离建立的经典人小细胞肺癌（SCLC）细胞系，源自一名小细胞肺癌患者的肿瘤组织，因高度还原临床小细胞肺癌的病理特征与分子背景，成为全球小细胞肺癌基础研究、药物研发及耐药机制探索领域的核心实验模型，为破解小细胞肺癌的恶性生物学行为与治疗困境提供了重要支撑。

一、核心生物学特性

作为典型的小细胞肺癌细胞系，NCI-H209 具备小细胞肺癌标志性的神经内分泌特性，可稳定表达嗜铬粒蛋白 A（CgA）、突触素（Syn）等神经内分泌标志物，与临床小细胞肺癌患者肿瘤组织的病理表型高度吻合。在倒置显微镜下，细胞呈圆形或短梭形，体积偏小，细胞质稀薄且透亮，细胞核大而致密，核质比显著高于正常细胞，核仁不清晰；生长方式为贴壁生长，培养过程中易形成松散的细胞聚团，但需依赖培养皿表面附着才能维持稳定增殖，传代时需通过消化处理使细胞分散成单细胞悬液。

NCI-H209 携带小细胞肺癌关键的分子遗传学改变，其中zui显著的是MYC 基因家族扩增（以 MYCN 扩增为主），这一分子特征与小细胞肺癌的高侵袭性、高转移性及不良预后直接相关。同时，该细胞系存在典型的 RB1 基因失活与 TP53 基因突变，这两种分子异常是小细胞肺癌发生发展的核心驱动事件，可导致细胞周期调控紊乱、凋亡机制失效，进而促使细胞无限增殖。此外，NCI-H209 不携带表皮生长因子受体（EGFR）敏感突变及间变性淋巴瘤激酶（ALK）融合，进一步确认了其作为小细胞肺癌特异性模型的可靠性，避免了与非小细胞肺癌细胞系的混淆。

在标准培养条件下，NCI-H209 的种群倍增时间约为 40-50 小时，增殖速率较快，细胞活力稳定（常规培养时活率可达 85%-90%）。当细胞融合度达到 75%-85% 时进入对数生长期，此时细胞形态均一、增殖活跃，是开展药物处理、基因编辑、信号通路分析等实验的最佳时期；若细胞融合度过高（超过 90%），易出现营养竞争加剧、代谢废物堆积，导致部分细胞凋亡或形态变形（如细胞拉长、细胞质颗粒增多），因此需及时传代以维持细胞的良好生长状态。

二、主要研究应用场景

依托与临床小细胞肺癌的分子同源性，NCI-H209 成为解析小细胞肺癌恶性生物学行为机制的理想工具。例如，通过 CRISPR/Cas9 技术敲除该细胞中的 MYCN 基因，可观察到细胞增殖速率显著减缓、迁移侵袭能力下降，且神经内分泌标志物表达水平降低，进而明确 MYCN 基因在小细胞肺癌进展与神经内分泌分化中的调控作用；此外，利用该细胞系研究 RB1/TP53 双失活对细胞周期的影响，可揭示小细胞肺癌细胞逃避 G1/S 期检查点、实现无限增殖的分子机制，为挖掘小细胞肺癌的潜在治疗靶点（如细胞周期蛋白依赖性激酶）提供实验依据。同时，NCI-H209 也常用于小细胞肺癌转移机制研究，通过 Transwell 实验观察细胞侵袭能力变化，探索调控肿瘤转移的关键信号通路（如 PI3K/AKT、MAPK 通路）。

作为体外药物活性检测的经典模型，NCI-H209 广泛应用于小细胞肺癌抗肿瘤药物的筛选与活性验证。在药物筛选实验中，可通过 MTT 法、CCK-8 法或细胞划痕实验，检测候选药物对该细胞增殖、迁移的抑制效果，计算半数抑制浓度（IC50），初步评估药物的抗肿瘤活性；对于已进入临床前研究的药物，还可利用该细胞系检测药物对细胞凋亡的诱导作用（如通过流式细胞术检测 Annexin V/PI 双阳性细胞比例）、对细胞周期的阻滞效应，为药物的临床转化提供关键体外数据。此外，NCI-H209 也可用于药物联合治疗方案的优化，例如将不同作用机制的药物（如细胞毒性药物与靶向药物）组合，观察协同抑制效果，为小细胞肺癌临床联合用药方案的制定提供参考。

小细胞肺癌临床治疗中易出现耐药复发，而 NCI-H209 是建立耐药细胞株、解析耐药机制的重要载体。通过逐步提高药物浓度（如临床常用药物）诱导该细胞系建立耐药细胞株（如 NCI-H209/DR），对比敏感株与耐药株的基因表达谱（如通过 RNA 测序）、蛋白水平变化（如通过 Western blot），可挖掘耐药相关分子。研究发现，耐药株中 ABC 转运蛋白（如 ABCB1、ABCG2）的表达显著升高，该蛋白可将细胞内药物泵出体外，降低胞内药物浓度，导致耐药；通过抑制 ABC 转运蛋白活性（如使用特异性抑制剂），可有效逆转耐药，为临床耐药患者的治疗提供新策略。此外，耐药株中 DNA 损伤修复基因（如 BRCA1、ATM）的异常激活，也是导致药物耐药的重要原因，这一发现为开发针对 DNA 损伤修复通路的 “合成致死" 药物提供了方向。

三、细胞培养关键要点

NCI-H209 常规使用 RPMI-1640 培养基进行培养，培养基需添加 10% 胎牛血清（FBS，需经 56℃热灭活 30 分钟，以去除补体成分对细胞的损伤），为细胞提供生长所需的营养物质（如氨基酸、维生素）与生长因子（如 EGF、IGF）；同时加入适量抗菌试剂预防细菌污染，维持培养基无菌状态。培养基的 pH 值需严格控制在 7.2-7.4 之间，使用前需在 37℃水浴锅中预热至室温，避免低温刺激导致细胞应激损伤。

细胞需置于 37℃、5% CO₂、湿度 95% 以上的恒温培养箱中培养：37℃为细胞代谢与增殖的最适温度，可维持酶活性与细胞生理功能；5% CO₂可通过调节培养基中碳酸氢盐的平衡，维持 pH 值稳定；95% 以上的湿度可防止培养基过度蒸发，避免渗透压改变影响细胞活性。培养过程中需定期检查培养箱参数，确保温度、CO₂浓度与湿度稳定，避免波动过大导致细胞生长异常。

当细胞融合度达到 75%-85% 时进行传代：首先用 PBS 缓冲液轻轻洗涤细胞 2 次，去除残留血清与代谢废物；随后加入适量消化液，37℃孵育 1-2 分钟，在显微镜下观察到细胞边缘收缩、变圆后，立即加入含血清的培养基终止消化（血清可中和消化液活性）；用移液器轻柔吹打细胞，使其分散成单细胞悬液，避免用力过猛损伤细胞；最后按 1:3-1:4 的比例将细胞接种到新的培养皿中，加入新鲜培养基，置于培养箱中继续培养。

冻存时需选用对数生长期的细胞（活力高、状态好），采用 90% FBS+10% DMSO 的混合液作为冻存液（DMSO 可降低细胞内冰晶形成，减少冻存损伤）；将细胞悬液与冻存液按 1:1 比例混合均匀，分装至冻存管中，标注细胞名称、冻存日期与代次；冻存过程需遵循梯度降温原则：4℃放置 30 分钟→-20℃放置 1 小时→-80℃过夜→转入液氮中长期保存（液氮温度为 - 196℃，可长期维持细胞活性）。复苏时，将冻存管从液氮中取出，快速放入 37℃水浴锅中，轻轻摇晃至液体wan全融化（时间不超过 1 分钟，避免细胞长时间处于低温环境）；随后将细胞悬液转移至离心管中，加入 5 倍体积的预热培养基，1000rpm 离心 5 分钟，去除 DMSO（DMSO 对细胞有一定毒性）；弃去上清液，用新鲜培养基重悬细胞后接种到培养皿中，复苏后 24 小时内避免换液，让细胞充分适应环境，提高存活率。

四、实验使用注意事项