NCI-H226人肺癌细胞，源自男性肺鳞癌患者，低分化特性。常作肺癌机制研究、药物筛选模型，贴壁生长，可在含血清培养基中培养，是肺癌研究常用工具细胞。

NCI-H226人肺癌细胞

NCI-H226人肺癌细胞 是由美国国家癌症研究所（NCI）于 1980 年从一名 54 岁男性肺鳞癌患者的胸腔积液中分离建立的细胞系，因高度模拟临床肺鳞癌的病理特征与分子背景，成为全球肺癌研究领域应用zui广泛的细胞模型之一，尤其在肺鳞癌机制探索、药物研发及耐药研究中具有不可替代的价值。

一、核心生物学特性解析

该细胞系明确归类为低分化肺鳞状细胞癌亚型，与临床中恶性程度高、预后较差的肺鳞癌患者病理表型高度契合。在倒置显微镜下，细胞呈多边形或梭形，细胞质丰富且边界清晰，细胞核大而不规则，核仁明显，核质比高；生长方式为典型贴壁生长，需依赖培养皿基质附着增殖，细胞排列紧密时呈 “铺路石" 样分布，传代前需通过消化液处理使细胞脱离基质。

NCI-H226 携带肺鳞癌标志性的分子改变：无表皮生长因子受体（EGFR）敏感突变及间变性淋巴瘤激酶（ALK）融合，与临床中约 80% 的野生型肺鳞癌患者分子背景一致；部分细胞株存在 p53 基因突变（常见于外显子 5-8），且伴有 PI3K/AKT 信号通路异常激活，这些分子特征使其成为研究野生型肺鳞癌发病机制的理想模型。此外，该细胞不表达神经内分泌标志物（如 CgA、Syn），可与小细胞肺癌细胞系明确区分。

在标准培养条件下，NCI-H226 的种群倍增时间约为 48-72 小时，细胞活力稳定（常规培养时活率可达 90% 以上）。当细胞融合度达到 80%-90% 时进入对数生长期后期，此时细胞增殖活跃、形态均一，是进行药物处理、转染等实验的最佳时期；若融合度过高（超过 95%），易出现细胞接触抑制，导致部分细胞凋亡或形态异常。

二、主要研究应用场景

凭借与临床肺鳞癌的分子同源性，NCI-H226 常被用于解析肺鳞癌的关键驱动通路。例如，通过 CRISPR/Cas9 技术敲除该细胞中的 p53 基因，可观察到细胞增殖速率加快、侵袭能力增强，进而验证 p53 失活在肺鳞癌进展中的促癌作用；此外，该细胞也是研究肺鳞癌上皮 - 间质转化（EMT）机制的常用模型，通过检测不同处理条件下 E - 钙粘蛋白、N - 钙粘蛋白的表达变化，可探索 EMT 相关信号通路对肿瘤转移的调控作用。

作为体外药物活性检测的 “金标准" 细胞系之一，NCI-H226 广泛应用于多种抗肿瘤药物的筛选与评价。在相关药物研究中，可通过 MTT 法或 CCK-8 法检测临床常用药物对该细胞的抑制率，计算 IC50 值以评估药物敏感性；在靶向药物研发中，因该细胞高表达 PD-L1，也被用于 PD-1/PD-L1 抑制剂的活性验证，通过检测药物处理后 T 细胞对 NCI-H226 的杀伤效率，评估药物治疗效果。

通过逐步提高药物浓度诱导 NCI-H226 建立耐药细胞株（如特定药物耐药株 NCI-H226/DR），可用于揭示肺鳞癌耐药的分子机制。研究发现，耐药株中 ABC 转运蛋白（如 ABCB1、ABCG2）表达显著升高，通过药物抑制该蛋白活性可逆转耐药，为临床耐药患者的治疗提供新靶点；此外，耐药株中 DNA 损伤修复基因（如 BRCA1）的异常表达，也为开发 “合成致死" 药物提供了实验依据。

三、细胞培养与质量控制要点

基础培养基选用 RPMI-1640，添加 10% 胎牛血清（FBS，需经热灭活处理）提供生长因子，同时加入适量抗菌试剂预防细菌污染；培养基 pH 值需维持在 7.2-7.4，使用前需在 37℃水浴锅中预热至室温，避免低温刺激细胞。

细胞需置于 37℃、5% CO₂、湿度 95% 以上的恒温培养箱中培养，CO₂浓度需稳定（波动范围不超过 ±0.5%），否则易导致培养基 pH 值异常；传代操作时，先用 PBS 缓冲液洗涤细胞 2 次，去除残留血清（避免影响消化液活性），再加入适量消化液，37℃孵育 1-2 分钟，待细胞边缘收缩、变圆后，加入含血清培养基终止消化，轻柔吹打制成单细胞悬液，按 1:3-1:5 的比例接种到新培养皿中。

冻存时采用 “两步法" 配置冻存液：以 90% FBS+10% DMSO 为基础，加入终浓度 5% 的葡萄糖提升细胞抗冻性；冻存过程需梯度降温（4℃放置 30 分钟→-20℃放置 1 小时→-80℃过夜→转入液氮长期保存），避免因温度骤降导致细胞内形成冰晶；复苏时需将冻存管快速放入 37℃水浴锅中，轻轻摇晃至液体wan全融化（时间不超过 1 分钟），随后加入 5 倍体积的预热培养基，离心（1000rpm，5 分钟）去除 DMSO，重悬后接种培养，复苏后 24 小时内避免换液，以提高细胞存活率。

长期培养需定期进行细胞身份验证，通过 STR 分型检测（检测 16 个 STR 位点）确认细胞身份，避免交叉污染（如与 HeLa 细胞混淆）；每传代 5-10 代需检测支原体污染（常用 PCR 法或荧光染色法），若发现污染需立即丢弃细胞，不可使用抗菌试剂挽救（避免筛选出耐药支原体）；此外，需定期观察细胞形态与生长速率，若出现细胞体积增大、增殖缓慢、贴壁能力下降等现象，提示细胞可能发生衰老或遗传漂变，需及时更换早期冻存的细胞株。

四、实验使用注意事项