143B TK-人胸腺激酶缺陷细胞

143B TK-人胸腺激酶缺陷细胞是基因工程与肿瘤研究领域的经典细胞模型，源于143B人骨肉瘤细胞系，通过化学诱变筛选获得胸腺激酶（TK）基因缺陷突变株。名称中“TK⁻"明确其核心特征——无法合成功能性胸腺激酶，这一缺陷使其具备独特的药物筛选敏感性，成为基因转移效率评估、病毒载体构建及抗癌药物研发的重要工具，在分子生物学和肿瘤学研究中应用广泛。

胸腺激酶缺陷是143B TK⁻细胞的功能核心，该酶在细胞嘌呤和嘧啶补救合成途径中负责将胸苷磷酸化为胸苷一磷酸（TMP）。TK基因缺陷导致细胞无法利用外源性胸苷合成DNA，只能依赖从头合成途径增殖；更关键的是，这一缺陷使细胞对核苷类似物药物（如丙氧鸟苷GCV、溴脱氧尿苷BrdU）产生特异性敏感性——这类药物进入细胞后，可被导入的外源TK基因磷酸化为毒性核苷酸，干扰DNA合成导致细胞死亡，基于此建立的“TK筛选系统"成为基因研究的经典方法。

在基因转移效率评估中，143B TK⁻细胞是金标准模型。科研人员将含TK基因的载体与目的基因共转染该细胞，通过GCV筛选即可高效富集阳性转染细胞——未转染细胞因自身TK缺陷对GCV不敏感，而转染细胞表达的TK将GCV转化为毒性物质被选择性清除。这种筛选方法不仅高效，且可通过细胞存活数量量化基因转移效率，为病毒载体（如腺病毒、慢病毒）的活性评估提供精准实验数据。

zi杀基因治疗研究是143B TK⁻细胞的核心应用场景。该细胞常被用于验证TKzi杀基因系统的抗肿瘤效果——将TK基因通过载体导入细胞构建模型，再给予GCV处理，可模拟临床zi杀基因治疗过程，观察GCV对“TK⁺"肿瘤细胞的杀伤效果及“旁观者效应"（即死亡细胞释放的毒性物质杀伤邻近未转染细胞）。这一模型为脑胶质瘤、肝癌等实体瘤的zi杀基因治疗方案优化提供了关键依据，推动了该疗法的临床转化。

143B TK⁻细胞的培养需兼顾缺陷特性与肿瘤细胞活性。常规采用含10%胎牛血清的DMEM培养基，培养环境维持37℃恒温、5% CO₂浓度，无需特殊添加剂即可稳定生长。细胞呈梭形贴壁生长，继承了骨肉瘤细胞的增殖特性，增殖周期约24-30小时，当细胞融合度达到80%-85%时传代zuijia。传代时用0.25%胰dan白酶-EDTA消化液处理1-2分钟，传代比例1:3-1:5，筛选实验中需注意GCV浓度梯度设置（通常0.1-10 μg/mL），避免浓度过高导致非特异性细胞死亡。

在抗癌药物研发领域，143B TK⁻细胞可用于核苷类似物药物的活性筛选，通过MTT法或CCK-8法检测药物对细胞的抑制率，评估药物杀伤肿瘤细胞的潜力；在DNA合成机制研究中，其补救合成途径缺陷的特性可用于解析从头合成途径的调控机制，为开发靶向DNA合成的抗癌药物提供靶点信息。此外，该细胞还用于病毒复制研究，因TK缺陷不影响多数病毒的复制周期，可作为病毒增殖与药物抑制实验的理想模型，持续为基因工程和肿liu治疗研究提供支撑。