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更新时间：2025-10-29
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NCI-H292人肺粘液上皮样癌细胞
NCI-H292人肺粘液上皮样癌细胞是肺癌研究领域中针对肺粘液上皮样癌（MEC）的核心实验模型，源自人肺粘液上皮样癌组织（罕见的肺原发性恶性肿瘤，占肺恶性肿瘤的 1%-2%，好发于中央气道），经体外分离、纯化及长期传代驯化建立。该细胞完整保留肺粘液上皮样癌 “粘液分泌功能活跃、上皮分化特征明显、恶性度中等" 的核心病理属性，传代 40 代以内仍稳定维持粘液合成相关分子表型，成为研究肺粘液上皮样癌发病机制、粘液分泌调控、抗肿瘤药物筛选及治疗敏感性评估的关键载体，为这一少见肺癌亚型的科研突破与临床治疗方案优化提供重要支撑。
一、核心生物学特性
（一）组织来源与细胞属性
NCI-H292 细胞源自临床肺粘液上皮样癌患者的中央气道肿瘤组织，与体内肿瘤细胞的遗传背景、病理形态高度一致。其核心优势体现在三方面：一是功能特异性突出，可持续合成并分泌酸性粘多糖类粘液（如粘蛋白 MUC5AC、MUC2），精准模拟体内肿瘤的粘液分泌特性，*肺粘液分泌型肿瘤模型的研究空白；二是分子特征明确，高表达上皮细胞标志物与粘液合成相关基因，且存在 CRTC1-MAML2 融合基因（肺粘液上皮样癌高频分子特征，约占 60%-70%），与临床患者分子谱匹配，适合机制研究；三是培养稳定性强，体外以贴壁生长为主，增殖速率可控，无需复杂诱导剂即可维持粘液分泌功能，实验重复性达 90% 以上，满足大规模研究需求。
（二）形态与生长特征
体外培养时，NCI-H292 细胞呈现典型肺粘液上皮样癌细胞形态：细胞呈多边形或柱状，排列紧密且具上皮样极性（模拟气道上皮细胞排列模式），胞质丰富且含大量嗜碱性粘液颗粒（光学显微镜下呈深蓝色点状或团块状聚集，PAS 染色呈阳性，是粘液分泌细胞的关键形态标志）；细胞核呈圆形或椭圆形，核质比中等，核仁清晰（1-2 个），染色质分布均匀，核分裂象中等（倍增时间约 60-72 小时，与肺粘液上皮样癌增殖特性一致），体现中等恶性增殖特性。
细胞生长无明显接触抑制，汇合度达 90% 后可形成局部 “铺路石样" 单层结构，部分区域因粘液堆积呈现透明状；常规接种密度以 3×10⁴-5×10⁴ cells/cm² 为宜，接种后 24-36 小时开始贴壁，48 小时贴壁率超 90%，72-96 小时进入对数生长期，144 小时左右汇合度达 85%-90%，需及时传代避免过度密集导致粘液过度堆积（影响细胞活性与营养吸收）。
（三）分子表型与功能特性
分子层面，NCI-H292 细胞呈现肺粘液上皮样癌特异性表型：一是高表达上皮与粘液相关标志物，如细胞角蛋白 18（CK18，阳性率≥90%，上皮细胞标志）、粘蛋白 MUC5AC（阳性率≥85%，气道粘液主要成分）、上皮细胞膜抗原（EMA，阳性率≥80%），可通过免疫荧光、Western blot 精准鉴定细胞身份；二是粘液合成相关分子异常活跃，高表达粘蛋白合成调控因子（如 FOXA2、KLF4）与粘液分泌相关转运蛋白（如 MUC1），为持续粘液分泌提供分子基础；三是存在典型分子特征，稳定携带 CRTC1-MAML2 融合基因（通过 RT-PCR 可稳定检测到融合转录本），该融合基因可驱动细胞异常增殖与粘液分泌，是肺粘液上皮样癌的核心致病因素。
功能上，该细胞具备两大核心特性：一是高效粘液分泌功能，分泌的粘液以酸性粘多糖为主，可通过 ELISA 检测粘液蛋白含量（约 15-25μg/10⁶cells/24h），或通过阿尔辛蓝染色直观观察粘液颗粒，模拟临床患者肿瘤组织 “粘液湖" 形成的病理特征；二是恶性增殖与侵袭能力，体外 Transwell 实验中，细胞穿过基质胶的侵袭率达 30%-45%，软琼脂克隆形成实验中克隆形成率达 25%-35%，体现其恶性转化特性，且粘液分泌量与侵袭能力呈正相关（粘液可增强细胞对基质的黏附与降解能力）。
二、体外培养与操作规范
（一）基础培养体系配置
NCI-H292 细胞对培养条件要求中等，需针对性配置培养基以维持粘液分泌功能与恶性特征：
培养基选择：优先使用RPMI-1640 培养基（含 25mM HEPES 缓冲液、1mM 丙酮酸钠），该培养基可稳定维持上皮细胞表型与粘液合成相关基因表达；若使用 DMEM 培养基，需额外添加 1% 非必需氨基酸与 10ng/mL 表皮生长因子（EGF），否则 MUC5AC 表达会下降 35% 以上，粘液分泌量减少 40%；
血清与添加剂：添加 10%-15% 胎牛血清（需筛选低内毒素批次，内毒素含量＜5EU/mL，避免刺激细胞过度分泌炎症因子影响粘液合成），加入 1% 抗菌试剂预防污染；无需额外添加外源粘液诱导剂，细胞可通过自分泌信号维持粘液分泌稳态，若需增强粘液分泌，可补充 5ng/mL 转化生长因子 -β（TGF-β）；
培养环境：温度控制在 37℃±0.5℃，CO₂浓度维持 5%±0.2%，湿度保持 95%±2%，pH 稳定在 7.2-7.4，渗透压 280-320mOsm/kg；使用普通细胞培养瓶（无需涂层，细胞贴壁能力较强），建议每 2-3 天更换一次培养基（因粘液堆积易消耗营养），更换时沿培养瓶壁缓慢加入，避免冲刷损伤贴壁细胞与粘液层。
（二）传代与功能维持操作
传代时机：当细胞汇合度达 85%-90% 或粘液堆积厚度超 5μm 时需及时传代（通常每 5-6 天一次），避免过度密集导致细胞脱落与粘液分泌功能异常（表现为 MUC5AC 表达下降）。传代比例按 1:3-1:5 稀释，固定比例（如 1:4）可确保粘液分泌表型稳定传递。
传代步骤：
弃去旧培养基，用无菌 PBS 轻柔冲洗细胞表面 2 次（动作缓慢，避免破坏粘液层与贴壁细胞）；
加入含 0.02% EDTA 的消化液（25cm² 培养瓶加 1mL），37℃孵育 3-5 分钟（因粘液层保护，细胞贴壁力稍强，消化时间需略长），显微镜下观察到细胞边缘收缩、间隙增大时，立即加入 2-3 倍体积含血清的培养基终止消化；
用移液器轻轻吹打培养瓶底部（力度适中，避免产生气泡破坏细胞），使细胞wan全脱落并分散为单个细胞，收集细胞悬液后离心（1000×g，5 分钟），弃上清后用新鲜培养基重悬，按预设比例接种至新培养瓶。
功能维持要点：长期传代易导致粘液分泌功能下降与 CRTC1-MAML2 融合基因表达不稳定，需每 8 代检测一次 MUC5AC 表达（阳性率需≥80%）、粘液分泌量（确保≥12μg/10⁶cells/24h）及融合基因转录本（通过 RT-PCR 验证）；若功能下降，可在培养基中添加 5ng/mL TGF-β 培养 48 小时，促进粘液合成相关基因表达；避免频繁更换血清批次，每次更换后需适应培养 2-3 代，待细胞增殖与粘液分泌功能稳定后再用于实验。
（三）冻存与复苏要点
冻存准备：选择对数生长期、粘液分泌正常的细胞（活力≥90%，MUC5AC 阳性率≥85%），冻存液按 “10% DMSO+20% 胎牛血清 + 70% RPMI-1640 培养基" 配制，全程在冰浴中操作，DMSO 缓慢滴加并轻柔混匀，防止温度骤降导致细胞结冰损伤与粘液颗粒破裂。
冻存流程：将细胞消化为单细胞悬液后离心（1000×g，5 分钟），弃上清；用预冷冻存液重悬细胞，调整浓度为 8×10⁶-1×10⁷ cells/mL（因粘液分泌细胞复苏存活率稍低，冻存浓度需高于普通肿瘤细胞），分装至冻存管；采用程序降温法：4℃放置 30 分钟→-20℃放置 1 小时→-80℃放置 12 小时→转入液氮长期保存，不可直接放入 - 80℃（易导致粘液颗粒聚团结冰，破坏细胞结构）。
复苏操作：从液氮取出冻存管后，立即放入 37℃水浴快速解冻（60-90 秒内wan全融化）；将细胞悬液缓慢加入 10 倍体积预热的含血清培养基，轻轻混匀后离心（1000×g，5 分钟）去除 DMSO；用新鲜培养基重悬细胞并接种至培养瓶，培养 24 小时后更换培养基，去除死细胞与残留 DMSO；复苏后 48 小时细胞活力可恢复至 85% 以上，72 小时后需检测 MUC5AC 表达与粘液分泌量，确保功能无显著损伤，一周后可正常开展实验。
三、主要研究应用场景
（一）肺粘液上皮样癌机制研究
NCI-H292 细胞是解析肺粘液上皮样癌恶性进展与粘液分泌机制的核心工具：
粘液分泌调控研究：通过 qPCR、Western blot 检测不同处理（如 TGF-β、信号通路抑制剂）下 MUC5AC、FOXA2 的表达变化，分析 PI3K/Akt、Wnt 等信号通路对粘液合成的调控；例如，抑制 PI3K 通路后，MUC5AC 表达量下降 50%，粘液分泌减少 45%，证实其对粘液分泌的正向调控作用；
融合基因功能研究：通过基因编辑技术沉默 CRTC1-MAML2 融合基因，对比沉默前后细胞增殖、粘液分泌能力变化；沉默后细胞倍增时间延长至 96 小时，MUC5AC 表达下降 60%，证实融合基因是驱动肿瘤增殖与粘液分泌的关键因素。
（二）抗肿瘤与抗粘液药物筛选
依托其粘液分泌特性，NCI-H292 细胞广泛用于肺粘液上皮样癌药物研发：
抗肿瘤药物筛选：将候选药物与细胞共培养，通过 CCK-8 法检测增殖抑制率，计算 IC50 值；例如，某拓扑异构酶 II 抑制剂对该细胞的 IC50 约 15-20nM，为临床用药剂量选择提供参考；
抗粘液治疗药物筛选：针对肿瘤粘液导致的治疗抵抗，筛选可抑制粘液合成或促进粘液降解的药物（如 MUC5AC 抑制剂、透明质酸酶）；例如，MUC5AC 抑制剂处理后，细胞粘液分泌量下降 70%，且对hua疗药物的敏感性提升 40%，为改善治疗效果提供新方向。
（三）粘液相关耐药与微环境研究
肺粘液上皮样癌的粘液层易导致治疗耐药，NCI-H292 细胞是理想研究模型：
粘液相关耐药机制研究：检测粘液层对药物渗透的影响（如通过高效液相色谱检测药物在细胞内的浓度），发现粘液层可使hua疗药物胞内浓度降低 55%，证实粘液层是耐药的重要屏障；
肿瘤微环境模拟研究：将 NCI-H292 细胞与气道成纤维细胞共培养，构建类器官模型，观察微环境对粘液分泌的影响；共培养后细胞 MUC5AC 表达升高 35%，证实微环境可促进肿瘤粘液分泌，为研究肿瘤 - 微环境相互作用提供支撑。
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