NCI-H358人非小细胞肺癌细胞源自人非小细胞肺癌组织，贴壁生长，具 KRAS 突变特征与强恶性（增殖快、侵袭强），表达癌标志物，是非小细胞肺癌机制、药物筛选的常用模型。

NCI-H358人非小细胞肺癌细胞

NCI-H358人非小细胞肺癌细胞是肺癌研究领域中针对非小细胞肺癌（NSCLC）的重要肿瘤模型，源自人外周型非小细胞肺癌组织（NSCLC 占肺癌总数 80%-85%，其中 KRAS 突变亚型临床治疗难度大），经体外分离、纯化及长期传代驯化建立。该细胞完整保留 NSCLC“增殖活跃、侵袭性强" 的核心病理特征，且稳定携带 KRAS 突变（肺癌高频驱动突变，约占 NSCLC 的 20%-30%），传代 40 代以内仍维持突变特征与亚型特异性分子表型，成为研究 KRAS 突变型 NSCLC 发病机制、靶向药物研发及治疗耐药的核心实验载体，为这一临床高发难治性肺癌亚型的科研突破与临床治疗方案优化提供关键支撑。

一、核心生物学特性

（一）组织来源与细胞属性

NCI-H358 细胞源自临床外周型非小细胞肺癌患者的肿瘤组织，与体内 KRAS 突变型 NSCLC 细胞的遗传背景、病理形态高度一致。其核心优势体现在三方面：一是突变特异性突出，稳定携带 KRAS G12C 突变（临床常见 KRAS 突变亚型，约占 KRAS 突变 NSCLC 的 40%），可精准模拟体内 KRAS 驱动的肿瘤发生发展过程，* KRAS 突变模型的研究空白；二是分子特征明确，高表达 NSCLC 相关标志物，且存在 p53 野生型、STK11 共突变等遗传特征，与临床 KRAS 突变患者分子谱高度匹配，适合机制研究；三是培养适应性强，体外以贴壁生长为主，增殖稳定，对培养基成分要求宽松，无需复杂生长因子即可维持突变表型，实验重复性达 90% 以上，满足大规模研究需求。

（二）形态与生长特征

体外培养时，NCI-H358 细胞呈现典型外周型 NSCLC 形态：细胞呈梭形或不规则多边形，排列松散无明显极性（模拟外周肺组织肿瘤生长模式），胞质透亮且含少量细小颗粒（为异常代谢相关细胞器）；细胞核呈椭圆形或不规则形，核质比中等偏高，核仁清晰（1-2 个），染色质呈细颗粒状分布，核分裂象频繁（倍增时间约 48-60 小时），体现中高恶性增殖特性。

细胞生长无接触抑制，汇合度达 90% 后可继续增殖形成局部多层堆积；常规接种密度以 4×10⁴-6×10⁴ cells/cm² 为宜，接种后 24 小时开始贴壁，48 小时贴壁率超 90%，72-96 小时进入对数生长期，120 小时左右汇合度达 85%-90%，需及时传代避免过度密集导致细胞活性下降（凋亡率超 10%）。

（三）分子表型与恶性功能特性

分子层面，NCI-H358 细胞呈现 KRAS 突变型 NSCLC 特异性表型：一是高表达 NSCLC 标志物，如细胞角蛋白 18（CK18，阳性率≥85%）、甲状腺转录因子 1（TTF-1，阳性率≥70%，外周型 NSCLC 特征），可通过免疫荧光、Western blot 精准鉴定细胞身份；二是核心突变与分子异常明确，稳定携带 KRAS G12C 突变（测序验证突变频率≥95%），伴随 STK11 共突变（约 30% KRAS 突变 NSCLC 患者存在，加剧治疗耐药），且异常激活 KRAS 下游通路（如 PI3K/Akt、MAPK/ERK，磷酸化水平较正常肺上皮细胞高 8-10 倍）；三是高表达肿瘤相关分子，如基质金属蛋白酶 2/9（MMP-2/9，促侵袭酶类）、血管内皮生长因子（VEGF，促血管生成）、Bcl-xL（抗凋亡蛋白）。

功能上，该细胞具备 KRAS 突变型 NSCLC 的关键恶性功能：一是强侵袭转移能力，体外 Transwell 实验中，细胞穿过基质胶的侵袭率达 50%-65%，划痕实验 24 小时愈合率超 70%，可模拟外周型肺癌突破肺组织屏障、向胸膜转移的过程；二是锚定非依赖性生长能力，软琼脂克隆形成率达 40%-50%，显著高于野生型 KRAS 肺癌细胞，体现 KRAS 驱动的恶性转化特性；三是耐药倾向明显，对传统hua疗药物（如shun铂）敏感性较低（IC50 约 15-20μM），与临床 KRAS 突变患者治疗响应一致。

二、体外培养与操作规范

（一）基础培养体系配置

NCI-H358 细胞对培养条件要求中等，需针对性配置培养基以维持 KRAS 突变表型与恶性功能：

（二）传代与功能维持操作

传代时机：当细胞汇合度达 85%-90% 时需及时传代（通常每 4-5 天一次），避免过度汇合导致 KRAS 通路活性异常（如 ERK 磷酸化水平下降）。传代比例按 1:3-1:5 稀释，固定比例（如 1:4）可确保突变表型稳定传递。

传代步骤：

功能维持要点：长期传代易导致 KRAS 突变频率下降与侵袭能力减弱，需每 8 代通过测序验证 KRAS G12C 突变频率（确保≥90%），检测 ERK 磷酸化水平（维持高活性）与 Transwell 侵袭率（确保≥50%）；若功能下降，可在培养基中添加 5ng/mL 表皮生长因子（EGF，增强 KRAS 通路激活）培养 24 小时，促进功能恢复；避免频繁更换血清批次，每次更换后需适应培养 2 代，待细胞增殖与突变功能稳定后再用于实验。

（三）冻存与复苏要点

冻存准备：选择对数生长期、KRAS 突变稳定的细胞（活力≥90%，突变频率≥95%），冻存液按 “10% DMSO+20% 胎牛血清 + 70% RPMI-1640 培养基" 配制，全程冰浴操作，DMSO 缓慢滴加并轻柔混匀，防止温度骤降损伤细胞与破坏突变表型。

冻存流程：细胞消化为单细胞悬液后离心（1000×g，5 分钟），弃上清；用预冷冻存液重悬细胞，调整浓度为 8×10⁶-1×10⁷ cells/mL（高于普通 NSCLC 细胞，确保复苏后突变细胞比例稳定），分装至冻存管；采用程序降温法：4℃放置 30 分钟→-20℃放置 1 小时→-80℃放置 12 小时→转入液氮长期保存，不可直接放入 - 80℃（易导致细胞聚团结冰，影响突变稳定性）。

复苏操作：从液氮取出冻存管后，立即放入 37℃水浴快速解冻（60-90 秒内wan全融化）；将细胞悬液缓慢加入 10 倍体积预热的含血清培养基，轻轻混匀后离心（1000×g，5 分钟）去除 DMSO；用新鲜培养基重悬细胞并接种至培养瓶，培养 24 小时后更换培养基，去除死细胞；复苏后 48 小时细胞活力可恢复至 85% 以上，72 小时后需检测 KRAS 突变频率与 ERK 活性，确保无显著损伤，一周后可正常开展实验。

三、主要研究应用场景

（一）KRAS 突变型 NSCLC 机制研究

NCI-H358 细胞是解析 KRAS 驱动肿瘤进展机制的核心工具：

（二）KRAS 靶向药物研发与筛选

依托其 KRAS G12C 突变特征，NCI-H358 细胞是靶向药物研发的关键模型：

（三）耐药机制与逆转研究

针对 KRAS 突变型 NSCLC 易耐药的特点，NCI-H358 细胞是耐药研究的理想模型：