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更新时间：2025-10-29
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NCI-H446人小细胞肺癌细胞
NCI-H446人小细胞肺癌细胞是肺癌研究领域中针对小细胞肺癌（SCLC）的关键实验模型，源自人小细胞肺癌组织（肺癌中恶性度最高、进展最快的亚型，占比 15%-20%），经体外分离纯化与传代驯化建立。该细胞完整保留小细胞肺癌 “神经内分泌特征突出、增殖快、转移早、预后差" 的核心病理属性，传代 40 代内仍稳定维持亚型特异性分子表型，成为研究小细胞肺癌发病机制、神经内分泌功能调控、抗肿瘤药物筛选及治疗耐药的核心载体，为这一难治性肺癌亚型的科研突破与临床转化提供重要支撑。
一、核心生物学特性
（一）组织来源与细胞属性
NCI-H446 细胞源自临床小细胞肺癌患者的肿瘤组织，与体内肿瘤细胞的遗传背景、病理形态高度一致。其核心优势体现在三方面：一是亚型特异性强，保留小细胞肺癌典型的神经内分泌分化特征，可模拟体内肿瘤在支气管黏膜微环境中的生长、浸润及远处转移过程；二是分子特征明确，高表达神经内分泌标志物与小细胞肺癌相关基因，且存在 RB1 缺失、TP53 突变等高频遗传异常，与临床患者分子谱匹配，适合机制研究；三是培养稳定性高，体外以悬浮生长为主，增殖速率可控，无需复杂生长因子即可维持活性，实验重复性达 90% 以上，满足大规模研究需求。
（二）形态与生长特征
体外培养时，NCI-H446 细胞呈现典型小细胞肺癌形态：以悬浮生长为主，部分聚集成松散团块（直径 20-40μm）；细胞体积小（直径 8-12μm），呈圆形或短梭形，胞质少而透亮，部分胞质含细小嗜酸性颗粒（神经内分泌颗粒，含递质或激素前体）；细胞核大而畸形，核质比ji高（约 1:1），核仁不明显，染色质细颗粒状分布，核分裂象极频繁（倍增时间 24-36 小时），体现高恶性增殖特性。
常规接种密度 5×10⁴-8×10⁴ cells/cm²，接种后无需贴壁直接增殖；24-48 小时进入对数生长期，细胞团数量显著增加；72-96 小时密度达 1×10⁶ cells/mL，需及时传代避免营养耗尽与凋亡（凋亡率超 15%），传代仅需分散细胞团，无需消化操作。
（三）分子表型与恶性功能特性
分子层面，NCI-H446 细胞呈现特异性表型：一是高表达神经内分泌标志物，如嗜铬粒蛋白 A（CgA，阳性率≥90%）、突触素（Syn，阳性率≥85%）、神经元特异性烯醇化酶（NSE，阳性率≥80%），可通过免疫荧光或 Western blot 验证身份；二是异常表达肿瘤相关分子，如 c-Myc（促增殖癌基因，较正常肺组织高 10 倍）、MMP-2（促侵袭酶）、VEGF（促血管生成因子），为恶性功能提供分子基础；三是存在高频遗传异常，RB1 缺失率约 90%、TP53 突变率超 80%，驱动肿瘤增殖与耐药。
功能上，该细胞具备三大恶性特征：一是ji强侵袭转移能力，Transwell 实验侵袭率 55%-70%，显著高于非小细胞肺癌模型；二是神经内分泌功能，分泌 5 - 羟色胺、促肾上腺皮质激素等，模拟临床 “异位内分泌综合征"；三是锚定非依赖性生长，软琼脂克隆形成率 45%-60%，体现强恶性转化特性。
二、体外培养与操作规范
（一）基础培养体系配置
NCI-H446 细胞对培养条件要求中等，需针对性配置体系：
培养基选择：优先使用RPMI-1640 培养基（含 25mM HEPES、1mM 丙酮酸钠、2mM L - 谷an酰胺），支持神经内分泌肿瘤细胞生长；若用 DMEM，需额外添加 1% 非必需氨基酸，否则神经内分泌标志物表达降 30% 以上；
血清与添加剂：添加 10%-15% 低内毒素胎牛血清（内毒素＜5EU/mL），加入 1% 抗菌试剂预防污染；无需生长因子，细胞自分泌信号可维持增殖；
培养环境：37℃±0.5℃、5% CO₂、95% 湿度，pH 7.2-7.4，渗透压 280-320mOsm/kg；用普通培养瓶（无需涂层），每 1-2 天换液，换液时收集细胞悬液离心后重悬，避免代谢废物积累。
（二）传代与功能维持操作
传代时机：密度达 8×10⁵-1×10⁶ cells/mL 或细胞团超 40μm 时传代（每 2-3 天一次），传代比例 1:4-1:6（快速扩增选 1:4，维持状态选 1:6）。
传代步骤：
摇晃培养瓶分散细胞团，收集全部悬液；
1000×g 离心 5 分钟，弃上清；
新鲜培养基重悬细胞，吹打 3-5 次分散大团块，按比例接种新瓶。
功能维持：每 8 代检测 CgA、Syn 表达（阳性率≥80%）与侵袭率（≥55%）；若功能下降，加 10nM TRH 培养 24 小时促进神经内分泌分化；避免频繁换血清，每次更换后适应 2 代再实验。
（三）冻存与复苏要点
冻存准备：选对数期细胞（活力≥90%，CgA 阳性率≥85%），冻存液为 “10% DMSO+20% 血清 + 70% RPMI-1640"，冰浴操作避免细胞损伤。
冻存流程：细胞悬液离心后重悬，浓度 1×10⁷-1.5×10⁷ cells/mL（悬浮细胞复苏率低，浓度需高），分装后程序降温（4℃30 分钟→-20℃1 小时→-80℃12 小时→液氮保存）。
复苏操作：冻存管 37℃水浴 40-60 秒融化，加 10 倍预热培养基离心去 DMSO，重悬接种后 24 小时换液；48 小时活力恢复至 80% 以上，72 小时检测标志物表达，一周后可实验。
三、主要研究应用场景
（一）小细胞肺癌机制研究
NCI-H446 细胞是解析发病机制的核心工具：
神经内分泌分化研究：检测 TRH、信号抑制剂对 CgA、Syn 的影响，如抑制 Notch 通路后 CgA 升 45%，证实其负向调控分化；
遗传异常功能研究：恢复 RB1 表达后，倍增时间延至 48 小时、侵袭率降 40%，明确 RB1 缺失的促癌作用。
（二）抗肿瘤药物筛选与评估
依托临床相关性，该细胞广泛用于药物研发：
广谱药物筛选：共培养候选药物后，测增殖抑制率与 IC50，如某拓扑异构酶抑制剂 IC50 为 5-10nM，为临床剂量提供参考；
靶向药物研发：针对 c-Myc、VEGF 等靶点，如 c-Myc 抑制剂使增殖率降 60%、凋亡率升 50%，体现治疗潜力。
（三）耐药机制与逆转研究
小细胞肺癌易耐药，该细胞是理想模型：
耐药模型构建：长期低浓度药物诱导构建耐药株，发现耐药株 ABC 转运蛋白高 12 倍，证实药物外排机制；
耐药逆转：加 ABC 转运蛋白抑制剂后，耐药株 IC50 从 20μM 降至 6μM，敏感性恢复，为临床逆转耐药提供支撑。
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