Neuro-2a小鼠神经母细胞瘤细胞

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Neuro-2a小鼠神经母细胞瘤细胞源自小鼠神经母细胞瘤，贴壁或半悬浮生长，可诱导分化为神经元样细胞，表达神经标志物，是神经生物学、神经毒性及药物筛选研究的常用模型。

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更新时间：2025-10-29

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Neuro-2a小鼠神经母细胞瘤细胞

Neuro-2a小鼠神经母细胞瘤细胞是神经科学领域常用的肿瘤源性神经细胞模型，源自 A/J 小鼠的自发性神经母细胞瘤，经体外分离纯化建立。该细胞兼具肿瘤细胞的稳定增殖特性与神经细胞的分化潜能，可在诱导条件下分化为具有成熟神经元特征的细胞，同时保留神经母细胞瘤的病理相关属性，成为神经生物学机制研究、神经退行性疾病模型构建、神经毒性评估及抗肿瘤药物筛选的重要实验载体，在基础科研与临床转化研究中应用广泛。

一、核心生物学特性

（一）组织来源与细胞属性

Neuro-2a 细胞源自小鼠外周神经系统的神经母细胞瘤，与体内神经母细胞瘤细胞的病理特征高度契合。作为未成熟神经细胞来源的肿瘤细胞系，其核心优势在于：一是分化可塑性强，无需复杂基因改造，仅通过化学诱导剂即可触发向神经元样细胞的分化，分化效率可达 60%-80%；二是病理相关性高，保留神经母细胞瘤细胞的部分恶性特征（如有限的侵袭能力），可用于神经母细胞瘤的发病机制与治疗研究；三是培养适应性好，体外增殖稳定，对培养基成分要求宽松，实验重复性高，适合大规模实验操作。

（二）形态与生长特征

体外培养时，Neuro-2a 细胞呈现 “贴壁 - 半悬浮" 混合生长状态：贴壁细胞呈多边形或短梭形，胞质均匀，细胞核大而圆润，核仁清晰（1-2 个），分裂象频繁，增殖能力旺盛；悬浮细胞呈圆形，多为处于对数生长期的活跃细胞，与贴壁细胞活性无显著差异。未分化状态下，细胞排列松散，无明显极性；经诱导分化后（如添加wei A 酸），细胞会逐渐伸出细长的神经突起（轴突样与树突样结构），长度可达细胞体直径的 8-12 倍，突起间可形成突触样连接，形态接近成熟原代神经元，且分化后细胞增殖速率显著减缓，进入功能成熟阶段。

细胞倍增时间约 24-30 小时，传代 50 代以内可维持稳定的形态与分化潜能；超过 50 代后，分化能力轻微下降，神经突起形成率降低。常规接种密度以 2×10⁴-4×10⁴ cells/cm² 为宜，接种后 12 小时开始贴壁，24 小时贴壁率达 75% 以上，48 小时进入对数生长期，72 小时汇合度可达 85%-90%，需及时传代避免过度密集导致细胞聚集。

（三）分子表型与功能特性

分子层面，Neuro-2a 细胞呈现 “未成熟 - 可分化" 的神经细胞表型：一是高表达神经前体细胞标志物，如巢蛋白（Nestin，神经干细胞 / 前体细胞特征蛋白）、神经细胞黏附分子（NCAM），未分化状态下阳性率达 90% 以上；二是分化后高表达成熟神经元标志物，如微管相关蛋白 2（MAP2，神经元骨架蛋白）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）、突触囊泡蛋白（SV2），这些分子的表达量随分化进程逐渐升高，可作为分化效果的验证指标；三是表达神经递质相关分子，如乙酰dan碱转移酶（ChAT）、多巴胺受体 D2，分化后这些分子的活性显著增强，为研究神经递质功能提供基础。

功能上，Neuro-2a 细胞具备丰富的神经相关功能：一是神经电生理活性，分化后细胞可形成功能性离子通道（如钠通道、钾通道、钙通道），通过膜片钳技术可记录到稳定的动作电位与突触后电位，模拟成熟神经元的电信号传递功能；二是神经毒性敏感性，对神经毒性物质（如 Aβ 淀粉样蛋白、重金属离子、兴奋性氨基酸）高度敏感，暴露后会出现神经突起wei缩、凋亡率升高、电生理活性异常等现象，可用于神经退行性疾病与环境神经毒性的机制研究；三是有限的侵袭能力，体外 Transwell 实验中可观察到细胞穿过基质胶的侵袭行为，且侵袭能力受抗肿瘤药物调控，适合神经母细胞瘤侵袭机制研究。

二、体外培养与操作规范

（一）基础培养体系配置

Neuro-2a 细胞对培养条件要求宽松，常规培养基即可满足生长与分化需求：

培养基选择：优先使用MEM 培养基（含 Earle's 盐、1mM 丙酮酸钠），也可使用 DMEM 培养基，两种培养基均能支持细胞稳定增殖；若需诱导分化，建议使用 MEM 培养基，分化效率较 DMEM 培养基高 15%-20%；

血清与添加剂：添加 10% 胎牛血清（无需筛选特殊批次，普通合格血清即可），加入 1% 抗菌试剂预防细菌污染；常规培养无需添加生长因子，若需促进分化，可在培养基中加入 10μM wei A 酸（zui常用诱导剂），诱导 5-7 天即可观察到明显神经突起；

培养环境：温度控制在 37℃±0.5℃，CO₂浓度维持 5%±0.2%，湿度保持 95%±2%，pH 稳定在 7.2-7.4，渗透压 280-320mOsm/kg；使用普通细胞培养瓶（无需涂层，细胞贴壁能力较强），每 2-3 天更换一次培养基，更换时避免过度冲洗，减少悬浮细胞丢失。

（二）传代与分化诱导操作

传代时机：未分化细胞在汇合度 85%-90% 时传代（每 2-3 天一次）；若进行分化实验，需在细胞汇合度 50%-60% 时加入诱导剂，此时细胞增殖活跃，分化潜能zui强。传代比例按 1:3-1:5 稀释，稀释比例可根据实验需求调整 —— 快速扩增按 1:3 稀释，维持细胞状态按 1:5 稀释。

传代步骤：

弃去旧培养基，用无菌 PBS 轻柔冲洗细胞表面 1 次（避免反复冲洗导致悬浮细胞与弱贴壁细胞脱落）；

加入含 0.02% EDTA 的胰dan白酶消化液（25cm² 培养瓶加 1mL），37℃孵育 1-1.5 分钟（细胞贴壁力中等，消化时间需严格控制），显微镜下观察到贴壁细胞边缘收缩、间隙增大时，立即加入 2 倍体积含血清培养基终止消化；

用移液器轻轻吹打培养瓶侧壁与底部，使贴壁细胞wan全脱落，与悬浮细胞混合后，轻轻吹打分散细胞团（避免产生气泡破坏细胞），收集细胞悬液后离心（1000×g，5 分钟），弃上清后用新鲜培养基重悬，按预设比例接种至新培养瓶。

分化诱导要点：诱导期间需每日观察细胞形态，确保神经突起正常生长；若出现细胞大量凋亡（漂浮细胞超过 10%），需降低wei A 酸浓度（如降至 5μM）或缩短诱导时间；分化结束后，通过免疫荧光检测 MAP2 表达（阳性率需≥60%），验证分化效果，确保后续实验可靠性。

（三）冻存与复苏要点

冻存准备：选择对数生长期、未诱导分化的细胞（活力≥95%，形态均一），冻存液按 “10% DMSO+20% 胎牛血清 + 70% MEM 培养基" 配制，全程在冰浴中操作，DMSO 缓慢滴加并轻柔混匀，防止温度骤降导致细胞结冰损伤。

冻存流程：将细胞悬液离心（1000×g，5 分钟），弃上清后用预冷冻存液重悬，调整浓度为 5×10⁶-8×10⁶ cells/mL，分装至冻存管（每管 1mL）；采用程序降温法：4℃放置 30 分钟→-20℃放置 1 小时→-80℃放置 12 小时→转入液氮长期保存，也可使用程序降温盒直接置于 - 80℃，简化操作流程。

复苏操作：从液氮取出冻存管后，立即放入 37℃水浴快速解冻（60-90 秒内wan全融化）；将细胞悬液缓慢加入 10 倍体积预热的含血清培养基，轻轻混匀后离心（1000×g，5 分钟）去除 DMSO；用新鲜培养基重悬细胞并接种至培养瓶，培养 24 小时后更换培养基，去除死细胞与残留 DMSO；复苏后 48 小时细胞活力可恢复至 90% 以上，形态与增殖能力无显著变化，一周后可正常进行分化诱导实验。

三、主要研究应用场景

（一）神经生物学机制研究

Neuro-2a 细胞因分化可塑性强，是解析神经细胞分化与功能机制的理想工具：

神经分化机制研究：通过wei A 酸诱导细胞分化，结合实时荧光定量 PCR（qPCR）与 Western blot 检测不同分化阶段（0 天、3 天、7 天）MAP2、NSE、Nestin 的表达变化，分析 Notch、Wnt、ERK 等神经分化相关信号通路的激活规律；例如，抑制 ERK 通路后，细胞神经突起形成率下降 50% 以上，证实该通路是神经分化的关键调控通路；

神经电生理机制研究：对分化后的细胞进行膜片钳实验，记录钠电流、钾电流的幅度与动力学特征，研究离子通道功能对神经元电信号的影响；添加离子通道调节剂（如钠通道激活剂），观察动作电位频率与幅度变化，为神经电生理紊乱相关疾病（如癫痫）的机制研究提供模型。

（二）神经退行性疾病与神经毒性研究

依托其神经毒性敏感性，Neuro-2a 细胞广泛用于神经疾病模型构建与毒性评估：

疾病模型构建：将细胞暴露于 Aβ 淀粉样蛋白（模拟阿尔茨海默病）、MPTP（模拟帕金森病）或 tau 蛋白过度磷酸化诱导剂，构建体外疾病模型；通过流式细胞术检测细胞凋亡率、免疫荧光检测病理蛋白（如 Aβ 聚集、磷酸化 tau）的表达，研究疾病病理进程；例如，Aβ 处理后，细胞凋亡率升高 40%，同时伴随 MAP2 表达下降，模拟阿尔茨海默病的神经元损伤特征；

神经毒性评估：将环境污染物（如重金属铅、汞）、药物候选化合物与细胞共培养，通过 CCK-8 法检测细胞活力、Hoechst 染色观察细胞核形态、检测乳酸脱氢酶（LDH）释放量，评估物质的神经毒性；例如，重金属铅处理后，细胞活力随浓度升高而降低，LDH 释放量显著增加，可量化评估其毒性强度。

（三）肿瘤研究与药物筛选

作为神经母细胞瘤细胞系，Neuro-2a 细胞是神经母细胞瘤研究与药物研发的重要模型：

肿瘤机制研究：通过 Transwell 实验、划痕实验检测细胞的侵袭与迁移能力，结合 Western blot 分析侵袭相关蛋白（如 MMP-2、MMP-9）的表达，研究神经母细胞瘤的侵袭转移机制；干扰特定基因（如致癌基因 MYCN）后，观察细胞增殖与侵袭能力变化，明确基因对肿瘤恶性表型的调控作用；

药物筛选：将抗肿瘤候选药物（如hua疗药物、靶向药物）与细胞共培养，通过 CCK-8 法检测药物对细胞增殖的抑制率、流式细胞术检测药物诱导的细胞凋亡率，筛选高效低毒的抗肿瘤药物；例如，某靶向药物处理后，细胞增殖抑制率达 60%，凋亡率升高 50%，且对分化后的神经元样细胞毒性较低，提示其潜在临床应用价值。

上一个：OPAs ELISA