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更新时间：2025-10-29
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NCI-H960人前列腺小细胞癌
NCI-H960人前列腺小细胞癌是前列腺癌研究领域中针对少见亚型的重要肿瘤细胞模型，源自人前列腺小细胞癌组织，经体外分离、纯化及长期传代驯化建立。该细胞完整保留前列腺小细胞癌的核心恶性特征，如高增殖活性、强侵袭转移潜能及神经内分泌分化表型，且体外培养稳定性高，传代 40 代以内仍维持亚型特异性病理属性，成为研究前列腺小细胞癌发病机制、神经内分泌分化调控、抗肿瘤药物筛选及治疗敏感性评估的核心实验载体，为这一少见亚型前列腺癌的科研与临床治疗突破提供关键支撑。
一、核心生物学特性
（一）组织来源与细胞属性
NCI-H960 细胞源自人前列腺小细胞癌组织，该亚型占前列腺癌总数的 1%-5%，却具ji强恶性程度与极差预后，NCI-H960 细胞的建立填bu了该亚型体外模型的空白。其核心优势体现在三方面：一是亚型特异性强，保留前列腺小细胞癌典型的神经内分泌分化特征，与临床患者肿瘤组织的病理表型高度一致，可模拟体内肿瘤的生长与转移过程；二是分子特征鲜明，高表达神经内分泌标志物与前列腺癌相关分子，且部分存在基因异常（如 RB1 缺失、TP53 突变），与临床亚型分子谱匹配，适合机制研究；三是培养适应性好，体外增殖稳定，对培养基成分要求宽松，无需特殊生长因子即可维持活性，实验重复性达 90% 以上，适合大规模实验操作。
（二）形态与生长特征
体外培养时，NCI-H960 细胞以贴壁生长为主，部分呈松散悬浮状态，呈现典型小细胞癌形态：细胞体积小，呈圆形或短梭形，胞质少而透亮（因神经内分泌颗粒聚集，部分细胞胞质可见细小嗜酸性颗粒）；细胞核大而畸形，核质比高，核仁不明显或仅 1 个细小核仁，染色质呈细颗粒状均匀分布，核分裂象极频繁（可见多极分裂、病理性核分裂），体现高恶性肿瘤细胞的核型异常特征。
细胞增殖能力ji强，倍增时间仅 24-36 小时，传代 40 代以内增殖速率无显著下降；无接触抑制特性，汇合后可密集叠加生长，易形成细胞聚团（聚团直径通常 50-100μm，不影响细胞活性）。常规接种密度以 4×10⁴-6×10⁴ cells/cm² 为宜，接种后 8-12 小时开始贴壁，24 小时贴壁率达 75% 以上，36-48 小时进入对数生长期，60-72 小时汇合度可达 85%-90%，需及时传代避免过度密集导致营养耗尽与细胞凋亡。
（三）分子表型与恶性功能特性
分子层面，NCI-H960 细胞呈现前列腺小细胞癌特异性表型：一是高表达神经内分泌标志物，如嗜铬粒蛋白 A（CgA）、突触素（Syn）、神经元特异性烯醇化酶（NSE），阳性率均达 90% 以上，可通过免疫荧光、Western blot 验证细胞亚型身份；二是表达前列腺癌相关分子，如前列腺特异性抗原（PSA，部分小细胞癌仍保留低表达）、雄激素受体（AR，表达水平较腺癌低），同时高表达癌相关基因产物，如 c-Myc（促增殖癌基因）、MMP-2/9（促侵袭酶类）；三是存在典型基因异常，如 RB1 基因缺失（80% 以上前列腺小细胞癌存在）、TP53 突变，这些分子特征是其恶性表型的核心基础。
功能上，该细胞具备前列腺小细胞癌的关键恶性功能：一是ji强侵袭转移能力，体外 Transwell 实验中，细胞穿过基质胶的侵袭率达 50%-65%，划痕实验中 24 小时划痕愈合率超 80%，显著高于前列腺腺癌模型；二是神经内分泌功能，可分泌神经递质（如 5 - 羟色胺、降钙素），分泌量可通过 ELISA 检测，模拟临床亚型的神经内分泌相关症状（如异位激素综合征）；三是锚定非依赖性生长能力，软琼脂克隆形成实验中克隆形成率达 40%-55%，体现其强恶性转化特性。
二、体外培养与操作规范
（一）基础培养体系配置
NCI-H960 细胞对培养条件要求中等，需针对性配置培养基以维持亚型特征与恶性功能：
培养基选择：优先使用RPMI-1640 培养基（含 25mM HEPES 缓冲液、1mM 丙酮酸钠），该培养基能更好支持神经内分泌肿瘤细胞生长；若使用 DMEM 培养基，需额外添加 1% 非必需氨基酸与 5mM 葡萄糖，否则细胞神经内分泌标志物表达会下降 25% 以上；
血清与添加剂：添加 10%-15% 胎牛血清（需筛选低内毒素批次，内毒素含量＜5EU/mL，避免刺激细胞过度分泌炎症因子），加入 1% 抗菌试剂预防细菌污染；无需额外添加生长因子，细胞可通过自分泌维持恶性增殖；
培养环境：温度控制在 37℃±0.5℃，CO₂浓度维持 5%±0.2%，湿度保持 95%±2%，pH 稳定在 7.2-7.4，渗透压 280-320mOsm/kg；使用普通细胞培养瓶（无需涂层，细胞贴壁能力中等），建议每 1-2 天更换一次培养基（因增殖快、营养消耗快），更换时轻柔操作，避免吹散悬浮细胞团。
（二）传代与功能维持操作
传代时机：当细胞汇合度达 85%-90% 或悬浮细胞团占比超 30% 时需及时传代（通常每 2-3 天一次），避免过度汇合导致细胞凋亡率升高（超过 10%）。传代比例按 1:4-1:6 稀释，稀释比例可根据实验需求调整 —— 快速扩增选 1:4，维持细胞状态选 1:6。
传代步骤：
收集培养瓶中所有液体（含悬浮细胞），用无菌 PBS 轻柔冲洗贴壁细胞表面 1 次，冲洗液与原培养液混合；
加入含 0.02% EDTA 的消化液（25cm² 培养瓶加 1mL），37℃孵育 1-1.5 分钟（小细胞癌贴壁力较弱，消化时间需严格控制），镜下见贴壁细胞边缘收缩、间隙增大时，立即加入 2 倍体积含血清培养基终止消化；
轻柔吹打贴壁细胞使其脱落，与之前收集的悬浮细胞混合，吹打分散细胞团（避免过度吹打导致细胞损伤），离心（1000×g，5 分钟）后用新鲜培养基重悬，按比例接种新瓶。
功能维持要点：长期传代易导致神经内分泌标志物表达下降与侵袭能力减弱，需每 8 代检测一次 CgA、Syn 表达（阳性率需≥85%）与 Transwell 侵袭率（确保≥50%）；若功能下降，可在培养基中添加 10nM 促甲状腺激素释放激素（TRH，促进神经内分泌分化）培养 24 小时，促进功能恢复；同时避免频繁更换血清批次，每次更换后需适应培养 2 代，待细胞功能稳定后再用于实验。
（三）冻存与复苏要点
冻存准备：选择对数生长期、功能正常的细胞（活力≥90%，CgA 阳性率≥85%），冻存液按 “10% DMSO+20% 胎牛血清 + 70% RPMI-1640 培养基" 配制，全程冰浴操作，DMSO 缓慢滴加并轻柔混匀，防止温度骤降导致细胞损伤。
冻存流程：收集贴壁与悬浮细胞，离心（1000×g，5 分钟）后弃上清；用预冷冻存液重悬细胞，调整浓度为 1×10⁷-1.5×10⁷ cells/mL（高于普通肿瘤细胞冻存浓度，因小细胞癌复苏存活率稍低），分装冻存管；采用程序降温法：4℃30 分钟→-20℃1 小时→-80℃12 小时→液氮保存，不可直接放入 - 80℃（易导致细胞聚团结冰）。
复苏操作：从液氮取出冻存管后，立即 37℃水浴快速解冻（40-60 秒融化），迅速将细胞悬液加入 10 倍体积预热培养基，轻轻混匀后离心（1000×g，5 分钟）去除 DMSO；用新鲜培养基重悬细胞并接种，培养 24 小时后更换培养基，去除死细胞；复苏后 48 小时细胞活力可恢复至 80% 以上，72 小时后检测神经内分泌标志物表达，确保功能无显著损伤，一周后可正常开展实验。
三、主要研究应用场景
（一）前列腺小细胞癌机制研究
NCI-H960 细胞是解析该亚型独特发病机制的核心工具：
神经内分泌分化机制研究：通过 qPCR、Western blot 检测不同处理（如 TRH）下 CgA、Syn 的表达变化，分析 Notch、PI3K/Akt 等信号通路对分化的调控；例如，抑制 Notch 通路后，CgA 表达量提升 40%，证实其负向调控神经内分泌分化；
基因异常功能研究：通过基因编辑技术（如恢复 RB1 表达、修复 TP53 突变），观察细胞增殖、侵袭能力变化，明确异常基因的致癌作用；恢复 RB1 表达后，细胞倍增时间延长至 48 小时，侵袭率下降 35%，证实 RB1 缺失的促癌作用。
（二）抗肿瘤药物筛选与敏感性评估
依托其亚型特异性，该细胞广泛用于针对性药物研发：
广谱抗肿瘤药物筛选：将临床常用抗肿瘤药物与细胞共培养，通过 CCK-8 法检测增殖抑制率，计算 IC50 值（半数抑制浓度），筛选高效药物；例如，某抗肿瘤药物对 NCI-H960 细胞的 IC50 约为 2-4μM，为临床用药提供参考；
靶向药物研发：针对细胞高表达的靶点（如 c-Myc、MMP-9），将候选靶向药物与细胞共培养，检测增殖、凋亡及侵袭变化；例如，c-Myc 抑制剂处理后，细胞增殖率下降 50%，凋亡率升高 40%，提示其潜在治疗价值。
（三）治疗耐药机制与逆转研究
前列腺小细胞癌易对治疗药物产生耐药，NCI-H960 细胞是耐药研究的理想模型：
耐药模型构建：长期低浓度抗肿瘤药物诱导细胞，构建耐药株，对比耐药株与敏感株的基因表达、代谢差异（如通过代谢组学）；耐药株中 ABC 转运蛋白表达量升高 10 倍，证实其介导的药物外排是耐药原因之一；
耐药逆转研究：将耐药逆转剂（如 ABC 转运蛋白抑制剂）与耐药细胞共培养，检测药物 IC50 变化；添加逆转剂后，目标抗肿瘤药物对耐药细胞的 IC50 从 15μM 降至 5μM，恢复敏感性，为临床逆转耐药提供实验依据。
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