P3/NSI/1-Ag4-1 [NS-1]小鼠骨髓瘤细胞源自 BALB/c 小鼠，悬浮生长，缺 HGPRT 且无内源性抗体分泌，融合效率高，是单克隆抗体制备、杂交瘤技术的经典工具。

P3/NSI/1-Ag4-1 [NS-1]小鼠骨髓瘤细胞

P3/NSI/1-Ag4-1 [NS-1]小鼠骨髓瘤细胞是杂交瘤技术领域的经典工具细胞，源自 BALB/c 小鼠骨髓瘤，由 P3X63Ag8 细胞经克隆筛选衍生而来，因独特的基因缺陷与功能特性，在单克隆抗体制备、抗体工程及免疫实验中占据重要地位，其稳定的生物学性能为相关研究提供了可靠支撑。

一、核心生物学特性

（一）来源与基因缺陷特征

该细胞源于 BALB/c 小鼠的骨髓瘤组织，是 P3X63Ag8 细胞的子代克隆株。核心基因缺陷为缺失 HGPRT，这一缺陷使其无法利用补救途径合成嘌呤与嘧啶，在特定筛选培养基中难以存活，为杂交瘤细胞的筛选提供了关键选择依据。同时，细胞内源性免疫球蛋白（Ig）重链与轻链基因表达沉默，无自身抗体分泌，避免了后续抗体检测中的干扰，显著提升单克隆抗体筛选的准确性。

（二）形态与生长特性

体外培养时，细胞呈典型悬浮生长状态，无贴壁倾向，少数细胞因培养条件波动可能短暂聚集，但无贴壁增殖活性。细胞形态为圆形或椭圆形，直径约 10-15μm，胞质透明洁净，无明显颗粒，细胞核居中且圆润，核仁清晰可见（1-2 个），染色质呈疏松网状，分裂象频繁，符合恶性浆细胞的增殖特征。

细胞增殖能力稳定，倍增时间约 24-30 小时，传代 50 代以内可维持稳定的生长状态与基因缺陷特性。培养过程中，细胞密度需控制在 1×10⁵-1×10⁶ cells/mL，密度过高（超过 1.5×10⁶ cells/mL）易因营养竞争、代谢废物堆积引发大规模凋亡；密度低于 5×10⁴ cells/mL 时，增殖速率会显著下降，需通过规律传代维持最佳密度区间。

（三）分子表型与功能优势

分子层面，细胞表面仅表达 MHCⅠ 类分子（H-2d 基因型），不表达 MHCⅡ 类分子及共刺激分子 CD40、CD80，这种表型使其在与 B 细胞融合时，不会因过度激活免疫反应影响杂交瘤细胞的形成与存活。

功能上，其优势集中体现在杂交瘤技术应用中：一是 HGPRT 缺陷稳定，在 HAT 培养基中无法存活，而与 B 细胞融合后，杂交瘤细胞可借助 B 细胞的 HGPRT 正常代谢，实现特异性筛选；二是无内源性抗体分泌，确保杂交瘤细胞分泌的抗体仅来自融合的 B 细胞，简化后续抗体鉴定流程；三是细胞融合效率高，表面黏附分子表达适宜，与免疫小鼠脾脏 B 细胞融合时，融合成功率显著高于普通骨髓瘤细胞株。

二、体外培养与操作规范

（一）基础培养体系配置

细胞对培养条件要求温和，常规采用优化的悬浮细胞培养方案：

（二）传代与密度监测

传代时机：当细胞密度达到 8×10⁵-1×10⁶ cells/mL 时需及时传代（通常每 24-36 小时一次），避免密度过高引发凋亡。传代比例根据实验需求调整，常规培养按 1:4-1:6 稀释，大规模扩增时可按 1:2-1:3 稀释，以快速获得足量细胞。

传代步骤：

密度监测：每日用台盼蓝染色法计数，确保细胞活力维持在 90% 以上，若活力低于 80%，需立即更换早期传代冻存细胞（如第 10-20 代细胞），保障细胞功能稳定。

（三）冻存与复苏操作

冻存准备：选择对数生长期、活力≥95% 的细胞，冻存液按 “10% DMSO+20% 胎牛血清 + 70% RPMI-1640 培养基" 配制，全程冰浴操作，DMSO 缓慢滴加并不断轻柔混匀，防止温度骤降损伤细胞。

冻存流程：离心收集细胞（1000×g，5 分钟），弃上清后用预冷冻存液重悬，调整浓度为 8×10⁶-1×10⁷ cells/mL，分装至冻存管；采用程序降温法：4℃静置 30 分钟→-20℃放置 1 小时→-80℃冷藏 12 小时→转入液氮长期保存（液氮温度需稳定在 - 196℃以下）。

复苏操作：从液氮取出冻存管后，立即放入 37℃水浴快速解冻（40-60 秒内融化），避免 DMSO 长时间接触细胞产生毒性；将细胞悬液缓慢加入 10 倍体积预热的新鲜培养基，轻轻混匀后离心（1000×g，5 分钟）去除 DMSO，用新鲜培养基重悬后接种至培养瓶。

复苏后观察：复苏 12 小时内可见少量细胞碎片，无需处理；24 小时后细胞可恢复正常增殖，若碎片比例超过 10%，需离心更换培养基并补充 2% 额外血清，促进细胞恢复。

三、主要研究应用场景

（一）单克隆抗体制备

作为融合伴侣，该细胞是单克隆抗体制备的核心工具：

（二）抗体工程研究

凭借无内源性抗体分泌的特性，该细胞是基因工程抗体表达的理想载体：

（三）免疫相关实验对照

在免疫实验中，该细胞可作为 “无抗体背景" 对照：