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Citrate stabilized 20nm-1 OD

更新时间:2023-04-19

简要描述:

CAT#:51000617V/510006160/51000616C/51000616F/510007160
PRODUCT NAME:Citrate stabilized 20nm-1 OD
SIZE:25 ml/100 ml/250 ml/500 ml
产品品牌:Nanoimmunotech
液体类标

  免费咨询:021-3455-6080

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CAT#:51000617V/510006160/51000616C/51000616F/510007160
PRODUCT NAME:Citrate stabilized 20nm-1 OD
SIZE:25 ml/100 ml/250 ml/500 ml
产品品牌:Nanoimmunotech
液体类标本:
标本必须为液体,不含沉淀。包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血浆。每个标本量收集体积=100ul×检测种类。
◇      血清:
室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。收集上清。如有沉淀形成,应再次离心。
◇      血浆:
应根据试剂盒的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,加入10%(v/v)抗凝剂(0.1M柠檬酸钠或1% heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。如有沉淀形成,应再次离心。
◇      尿液、胸腹水、脑脊液:
用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。如有沉淀形成,应再次离心。
◇      细胞培养上清:
检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
◇      组织标本:
切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,缓冲液中可加入1μg/L蛋白酶抑制剂或50U/ml的Aprotinin。用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清置于-20度或- 70度保存,如有必要,可以将样品浓缩干燥。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

  液体培养基的保存是冷藏好?还是冷冻好?

  要冷藏!!因为液体培养基经冷冻后再经溶化时,其溶液的pH值会发生改变,溶液往往变碱,某些成分溶解也会受到影响对细胞生长不利。故液体培养基一定要存放在冷藏箱中,通常液体培养基在冷藏条件下可存放6个月 ~ 一年

 细胞计数及存活测试
1、原理:
(1)计算细胞数目可用血球计数盘或是Coultercounter粒子计数器自动计数。
(2)血球计数盘一般有二个chambers,每个chamber中细刻9个1mm2大正方形,其中4个角落之正方形再细刻16个小格,深度均为0.1mm。当chamber上方盖上盖玻片后,每个大正方形之体积为1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使用时,计数每个大正方形内之细胞数目,乘以稀释倍数,再乘以104,即为每ml中之细胞数目。
(3)存活测试之步骤为dyeexclusion,利用染料会渗入死细胞中而呈色,而活细胞因细胞膜完整,染料无法渗入而不会呈色。一般使用蓝色之trypan blue染料,如果细胞不易吸收trypan blue,则用红色之Erythrosin bluish。计算细胞活率:活细胞数/(活细胞数+死细胞数)×100%。计数应在台盼兰染色后数分钟内完成,随时间延长,部分活细胞也开始摄取染料;因为台盼兰对蛋白质有很强的亲和力,用不含血清的稀释液,可以使染色计数更为准确。

 细胞特性
在细胞培养之前,我们要了解一下你所要养细胞的基本特性,这点可以从细胞的产品说明书或者从ATCC细胞库查询。除此之外我们还要知道每管细胞的数量,建议分裂或传代的比例,和已知细胞的传代代次等信息。

  准备培养基
复苏细胞时需要准备合适的培养基,血清和细胞生长所需的添加剂。大部分培养细胞所用的培养体系,可以在订购细胞系时获得。
虽然大多数细胞系可以在不止一种培养基中生长,但是当培养基改变时,细胞的性质也会变化。因此,使用细胞库推荐的培养基来培养细胞会获得的效果。

  开启冻存管
1.准备一个培养瓶,加入适宜细胞培养的培养基,液体体积按照说明书的推荐配置,并平衡培养基的温度和pH(CO2)。 
2.在37℃水浴中或细胞的正常生长温度下将冻存管轻轻摇动。解冻要快,约2分钟或直到冰晶融化即可。
3.从水浴中取出冻存管并用浸泡或喷洒70%乙醇的方式来消毒。进一步的操作均需在无菌操作台中严格无菌条件下进行。
4.拧开冻存管的管帽并将内容物转移到一个含有9 ml推荐培养基的无菌离心管中。通过温和离心(125×g 10 min)除去冷冻保护剂(DMSO)。弃去上清,并用1或2 ml*培养基重悬细胞。将这些细胞悬液转移到含有*培养基的培养瓶中并轻轻摇动以*混匀。
5.培养24小时后检查细胞状态并在需要时进行传代。

  由于,大多数细胞适宜pH为7.2~7.4,偏离此范围对细胞将产生有害的影响。各种细胞对pH的要求也不*相同,原代培养细胞一般对pH变动耐受差,无限细胞系耐受力强。

  但总体来说,细胞耐酸性比耐碱性强一些,偏酸环境中更利于细胞生长。因此,我们在配制培养用液时,可把液体的pH稍微调得偏酸一些。液体在经过0.10um或0.22um滤膜过滤时,溶液的pH还会向上浮动0.2左右。


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上海佰晔生物科技中心

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工厂地址:上海市闵行区金都路4299号

主营产品:自产ELISA试剂盒,进口ELISA试剂盒,ELISA试剂盒,试剂盒,进口试剂代理,人细胞株,大鼠细胞株,小鼠细胞株,小包装抗体,流式抗体

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