更新时间:2023-04-24
CAT#:03000215U/03000215W/03000215Y/03000215SPRODUCT NAME:LinkOriented Kit MAGNETIC 200nmSIZE:2 mL/5 mL/10 mL/1 mL产品品牌:Nanoimmunotech液体类标本:标本必须为液体,不含沉淀。包括
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液体培养基的保存是冷藏好?还是冷冻好?
要冷藏!!因为液体培养基经冷冻后再经溶化时,其溶液的pH值会发生改变,溶液往往变碱,某些成分溶解也会受到影响对细胞生长不利。故液体培养基一定要存放在冷藏箱中,通常液体培养基在冷藏条件下可存放6个月 ~ 一年。
细胞计数及存活测试
1、原理:
(1)计算细胞数目可用血球计数盘或是Coultercounter粒子计数器自动计数。
(2)血球计数盘一般有二个chambers,每个chamber中细刻9个1mm2大正方形,其中4个角落之正方形再细刻16个小格,深度均为0.1mm。当chamber上方盖上盖玻片后,每个大正方形之体积为1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使用时,计数每个大正方形内之细胞数目,乘以稀释倍数,再乘以104,即为每ml中之细胞数目。
(3)存活测试之步骤为dyeexclusion,利用染料会渗入死细胞中而呈色,而活细胞因细胞膜完整,染料无法渗入而不会呈色。一般使用蓝色之trypan blue染料,如果细胞不易吸收trypan blue,则用红色之Erythrosin bluish。计算细胞活率:活细胞数/(活细胞数+死细胞数)×100%。计数应在台盼兰染色后数分钟内完成,随时间延长,部分活细胞也开始摄取染料;因为台盼兰对蛋白质有很强的亲和力,用不含血清的稀释液,可以使染色计数更为准确。
细胞特性
在细胞培养之前,我们要了解一下你所要养细胞的基本特性,这点可以从细胞的产品说明书或者从ATCC细胞库查询。除此之外我们还要知道每管细胞的数量,建议分裂或传代的比例,和已知细胞的传代代次等信息。
准备培养基
复苏细胞时需要准备合适的培养基,血清和细胞生长所需的添加剂。大部分培养细胞所用的培养体系,可以在订购细胞系时获得。
虽然大多数细胞系可以在不止一种培养基中生长,但是当培养基改变时,细胞的性质也会变化。因此,使用细胞库推荐的培养基来培养细胞会获得的效果。
开启冻存管
1.准备一个培养瓶,加入适宜细胞培养的培养基,液体体积按照说明书的推荐配置,并平衡培养基的温度和pH(CO2)。
2.在37℃水浴中或细胞的正常生长温度下将冻存管轻轻摇动。解冻要快,约2分钟或直到冰晶融化即可。
3.从水浴中取出冻存管并用浸泡或喷洒70%乙醇的方式来消毒。进一步的操作均需在无菌操作台中严格无菌条件下进行。
4.拧开冻存管的管帽并将内容物转移到一个含有9 ml推荐培养基的无菌离心管中。通过温和离心(125×g 10 min)除去冷冻保护剂(DMSO)。弃去上清,并用1或2 ml*培养基重悬细胞。将这些细胞悬液转移到含有*培养基的培养瓶中并轻轻摇动以*混匀。
5.培养24小时后检查细胞状态并在需要时进行传代