NCTC1469小鼠正常肝细胞

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NCTC1469小鼠正常肝细胞源自小鼠正常肝脏组织，贴壁生长，保留肝细胞功能（如代谢、合成蛋白），无恶性特征，是肝脏生理、肝毒性及药物代谢研究的常用模型。

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更新时间：2025-10-29

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NCTC1469小鼠正常肝细胞

NCTC1469小鼠正常肝细胞是肝脏生物学与毒理学研究领域的经典正常细胞模型，源自 C3H 小鼠的正常肝脏实质组织，经体外分离、纯化及标准化培养建立。该细胞完整保留了体内正常肝细胞的核心生理功能，无恶性增殖特征，且体外培养稳定性高，传代 50 代以内仍维持肝细胞特异性表型，成为研究肝脏生理代谢、肝毒性评估、药物代谢机制及肝脏疾病病理进程的理想工具，为基础肝脏研究与临床转化提供可靠的体外实验载体。

一、核心生物学特性

（一）组织来源与细胞属性

NCTC1469 细胞源自小鼠肝脏实质中的肝细胞，与体内正常肝细胞的生理特征高度一致。作为非肿瘤源性的正常细胞系，其核心优势体现在三方面：一是功能真实性，保留肝细胞te有的物质代谢、蛋白合成与解毒功能，可模拟体内肝脏的生理过程；二是遗传稳定性，长期传代仍维持正常二倍体核型，无染色体异常或基因突变，实验结果重复性高；三是培养适应性，虽为正常细胞，但体外增殖能力稳定，无需复杂生长因子即可维持活性，克服了原代肝细胞培养周期短、易老化的问题。

（二）形态与生长特征

体外培养时，NCTC1469 细胞以贴壁生长为主，呈现典型的肝细胞形态特征：细胞呈多边形或不规则圆形，胞质丰富且透亮，部分细胞可见细小的胞质颗粒（与肝细胞的代谢功能相关）；细胞核呈圆形或椭圆形，位于细胞中央，核仁清晰（1-2 个），染色质分布均匀，分裂象较少（倍增时间约 48-60 小时），符合正常体细胞的生长特性。

细胞生长具有明显的 “接触抑制" 特征，当汇合度达 90% 以上时，增殖速率显著减缓，不再叠加生长，维持单层细胞形态，这一特征区别于肿瘤细胞的无序增殖。常规接种密度以 2×10⁴-3×10⁴ cells/cm² 为宜，接种后 24 小时开始贴壁，48 小时贴壁率达 90% 以上，72-96 小时进入对数生长期，120 小时左右汇合度可达 85%-90%，需及时传代以避免细胞老化。

（三）分子表型与功能特性

分子层面，NCTC1469 细胞呈现特异性的肝细胞表型：一是高表达肝细胞标志物，如白蛋白（Albumin，肝细胞特异性合成蛋白）、细胞角蛋白 8/18（CK8/18，上皮源性肝细胞特征蛋白）、谷氨酰转移酶（GGT，肝细胞代谢相关酶），阳性率均达 85% 以上，可通过免疫荧光、Western blot 或 ELISA 验证细胞身份；二是表达肝脏代谢关键酶，如细胞色素 P450 酶系（CYP450，如 CYP1A2、CYP2E1，参与药物与毒物代谢）、尿素循环相关酶（如鸟an酸氨基甲酰转移酶 OCT），这些酶的活性与体内正常肝细胞接近，是其用于代谢研究的核心基础。

功能上，该细胞具备正常肝细胞的核心生理功能：一是物质合成功能，可稳定合成并分泌白蛋白（分泌量约 10-15μg/10⁶ cells/24h），通过 ELISA 可检测其分泌水平，反映肝细胞的合成能力；二是代谢功能，能参与葡萄糖代谢、脂质代谢及尿素合成，体外培养时可检测到培养基中尿素浓度随培养时间升高，模拟体内肝脏的解毒代谢过程；三是药物代谢功能，CYP450 酶系活性稳定，可代谢多种外源性物质（如药物、环境毒物），代谢产物可通过高效液相色谱（HPLC）检测，适合药物代谢动力学研究。

二、体外培养与操作规范

（一）基础培养体系配置

NCTC1469 细胞对培养条件要求中等，需针对性配置培养基以维持肝细胞功能：

培养基选择：优先使用MEM 培养基（含 Earle's 盐、1mM 丙酮酸钠、非必需氨基酸），该培养基能更好支持正常肝细胞的生长与代谢功能；若使用 DMEM 培养基，需额外添加 2mM L - 谷an酰胺，否则细胞代谢活性会下降 20% 以上；

血清与添加剂：添加 10%-15% 胎牛血清（需筛选低内毒素、高营养批次，避免影响肝细胞代谢），加入 1% 抗菌试剂预防细菌污染；无需添加生长因子，细胞可通过自分泌维持正常增殖与功能；

培养环境：温度控制在 37℃±0.5℃，CO₂浓度维持 5%±0.2%，湿度保持 95%±2%，pH 稳定在 7.2-7.4，渗透压 280-320mOsm/kg；使用普通细胞培养瓶（无需涂层，肝细胞贴壁能力较强），建议每 2-3 天更换一次培养基，更换时保留 1/4 旧培养基，减少环境波动对肝细胞代谢功能的影响。

（二）传代与功能维持操作

传代时机：当细胞汇合度达 85%-90% 时需及时传代（通常每 4-5 天一次），避免过度汇合导致细胞老化（表现为细胞体积增大、白蛋白分泌减少）。传代比例按 1:2-1:3 稀释，稀释比例不宜过高（低于 1:4 易导致细胞密度过低，影响代谢功能）。

传代步骤：

弃去旧培养基，用无菌 PBS 轻柔冲洗细胞表面 2 次（动作缓慢，避免冲刷损伤贴壁细胞）；

加入含 0.02% EDTA 的消化液（25cm² 培养瓶加 1mL），37℃孵育 2-3 分钟（正常肝细胞贴壁力中等，消化时间需严格控制），显微镜下观察到细胞边缘收缩、间隙增大时，立即加入 2-3 倍体积含血清培养基终止消化；

用移液器轻轻吹打培养瓶底部（力度适中，避免产生气泡破坏细胞），使细胞wan全脱落并分散为单个细胞，收集细胞悬液后离心（1000×g，5 分钟），弃上清后用新鲜培养基重悬，按预设比例接种至新培养瓶。

功能维持要点：长期传代易导致肝细胞代谢酶活性下降，需每 10 代检测一次白蛋白分泌量（确保≥10μg/10⁶ cells/24h）与 CYP450 酶活性（如 CYP1A2 活性需≥0.5nmol/min/mg 蛋白）；若活性下降，可在培养基中添加 5ng/mL 胰岛素（促进肝细胞代谢功能）培养 24 小时，促进功能恢复；同时避免频繁更换血清批次，每次更换后需适应培养 2-3 代，待细胞代谢功能稳定后再用于实验。

（三）冻存与复苏要点

冻存准备：选择对数生长期、功能正常的细胞（活力≥90%，白蛋白分泌≥10μg/10⁶ cells/24h），冻存液按 “10% DMSO+20% 胎牛血清 + 70% MEM 培养基" 配制，全程在冰浴中操作，DMSO 缓慢滴加并轻柔混匀，防止温度骤降导致细胞结冰损伤。

冻存流程：将细胞消化为单细胞悬液后离心（1000×g，5 分钟），弃上清；用预冷冻存液重悬细胞，调整浓度为 8×10⁶-1×10⁷ cells/mL（高于普通细胞冻存浓度，提升复苏成功率），分装至冻存管；采用程序降温法：4℃放置 30 分钟→-20℃放置 1 小时→-80℃放置 12 小时→转入液氮长期保存，也可使用程序降温盒直接置于 - 80℃，简化操作流程。

复苏操作：从液氮取出冻存管后，立即放入 37℃水浴快速解冻（60-90 秒内wan全融化）；将细胞悬液缓慢加入 10 倍体积预热的含血清培养基，轻轻混匀后离心（1000×g，5 分钟）去除 DMSO；用新鲜培养基重悬细胞并接种至培养瓶，培养 24 小时后更换培养基，去除死细胞与残留 DMSO；复苏后 48 小时细胞活力可恢复至 85% 以上，72 小时后需检测白蛋白分泌与代谢酶活性，确保功能无显著损伤，一周后可正常开展实验。

三、主要研究应用场景

（一）肝脏生理与代谢机制研究

NCTC1469 细胞是解析肝脏基础生理功能的理想工具：

肝细胞合成功能研究：通过 ELISA 检测不同培养条件下（如添加激素、营养物质）白蛋白的分泌变化，结合 Western blot 分析白蛋白合成相关信号通路（如 JAK-STAT）的激活情况，明确调控肝细胞合成功能的关键分子；例如，添加胰岛素后，白蛋白分泌量提升 30%，STAT3 磷酸化水平升高 2 倍，证实该通路的调控作用；

肝脏代谢酶功能研究：通过 HPLC 检测细胞对特定底物（如 CYP1A2 底物非那xi丁）的代谢产物生成量，分析 CYP450 酶系的活性变化；干扰特定 CYP450 酶基因后，观察代谢产物变化，明确酶在药物代谢中的作用，为药物代谢机制研究提供依据。

（二）肝毒性评估与药物筛选

依托其正常肝细胞属性，该细胞广泛用于肝毒性评估与药物研发：

肝毒性评估：将药物候选化合物、环境毒物（如四氯化碳、重金属）与细胞共培养，通过 CCK-8 法检测细胞活力、LDH 释放量（反映细胞膜损伤）、丙二醛（MDA，反映氧化损伤）含量，评估物质的肝毒性；例如，四氯化碳处理后，细胞活力下降 40%，LDH 释放量与 MDA 含量显著升高，可量化评估其肝毒性强度；