RKO人结肠癌细胞源自人结肠癌组织，呈上皮样贴壁生长，具恶性增殖与侵袭潜能，是结肠癌发病机制、药物筛选及肿瘤微环境研究的常用细胞模型。

RKO人结肠癌细胞

RKO人结肠癌细胞是结直肠癌基础研究与转化医学领域的经典细胞模型，源自 52 岁男性结肠癌患者的原发性肿瘤组织，经原代分离、体外培养与克隆筛选建立。作为能稳定复现结肠癌核心生物学特征的细胞系，它不仅保留了结肠癌细胞的恶性增殖、侵袭转移潜能及典型的肿瘤分子表型（如野生型 p53 基因），还因对临床常用抗结直肠癌药物敏感，成为研究结肠癌发病机制、药物抵抗机制及抗肿瘤药物筛选的理想工具，广泛应用于肿瘤学基础研究、结直肠癌治疗策略优化及药物研发等领域。

从生物学特性来看，RKO 人结肠癌细胞呈现鲜明的结肠癌细胞形态与功能特征。光学显微镜下，细胞呈多边形或短梭形的上皮样形态，贴壁生长时排列紧密但极性紊乱，部分区域可见细胞堆叠生长（体现肿瘤细胞的无序增殖特征）；胞质丰富，偶见细小颗粒或空泡，细胞核呈圆形或椭圆形，位于细胞中央或偏位，染色质分布不均，核仁明显且数量增多（多为 2-3 个），偶见双核或多核细胞，核异型性程度符合中分化结肠癌的病理特征。功能层面，该细胞的核心优势在于三大关键恶性属性：一是强增殖能力，在适宜培养条件下可持续快速增殖，无明显接触抑制特性，对数期倍增时间约为 24-36 小时，显著短于正常结肠上皮细胞；二是侵袭转移潜能，通过 Transwell 实验可检测到细胞具备较强的穿膜能力，能分泌基质金属蛋白酶（如 MMP-2、MMP-9）降解细胞外基质，模拟体内结肠癌的局部浸润与远处转移过程；三是药物敏感性，对临床常用抗结直肠癌药物表现出典型的剂量依赖性抑制效应，可用于药物疗效评估与药物抵抗机制研究。此外，细胞还保留结肠上皮细胞的部分表型特征，如表达细胞角蛋白（CK8/18）等上皮特异性标志物，可通过免疫检测快速鉴定细胞身份。

在培养操作与质量控制层面，RKO 人结肠癌细胞的培养需重点关注 “维持恶性表型与药物敏感性"，避免因操作不当导致细胞特性漂移。培养基选择上，常规使用含 10% 胎牛血清的 DMEM 高糖培养基，血清需经过支原体检测与肿瘤细胞兼容性验证，确保无有害微生物且富含细胞生长所需的营养因子（如 EGF、FGF）；无需额外添加特殊生长因子，基础培养基即可满足细胞增殖需求，若长期使用低糖或低血清培养基，可能导致细胞增殖速率下降或侵袭能力减弱。培养操作时，可使用普通塑料培养皿（无需包被，细胞贴壁能力较强），但需避免频繁更换培养环境，减少对细胞的机械刺激；传代流程需精准控制消化时间：先用无菌 PBS 缓冲液轻柔冲洗细胞表面 2-3 次，去除残留培养基与代谢废物，随后加入 0.25% 的细胞消化液（含 EDTA），37℃孵育 2-3 分钟，待显微镜下观察到细胞边缘收缩、间隙增大时，立即加入含血清的培养基终止消化，用移液器轻柔吹打形成单细胞悬液（避免过度吹打导致细胞损伤），按 1:4-1:6 的比例接种至新培养皿，24 小时内即可完成贴壁与增殖启动。质量控制方面，需定期开展多维度检测：通过台盼蓝染色确保细胞活力≥90%；通过免疫细胞化学染色验证上皮特异性标志物（CK8/18）与肿瘤相关标志物（如 Ki-67 增殖指数）的阳性表达率（Ki-67 阳性率需≥70%），确认细胞恶性表型稳定；通过 CCK-8 法检测细胞对临床常用抗结直肠癌药物的敏感性（IC₅₀值需维持在临床相关浓度范围），验证药物应答能力；若用于侵袭研究，还需通过 Transwell 实验检测细胞穿膜数，确保侵袭潜能未退化。

在科研应用领域，RKO 人结肠癌细胞凭借 “恶性特征典型 + 药物敏感" 的优势，在多个结肠癌研究方向中发挥核心作用。结肠癌发病机制研究中，它是解析结肠癌恶性进展分子机制的理想模型 —— 科研人员可利用其野生型 p53 基因背景，研究 p53 通路在结肠癌凋亡调控中的作用：例如通过基因编辑技术敲除 p53 基因，观察细胞增殖速率、凋亡率及对临床常用抗结直肠癌药物的敏感性变化，明确 p53 失活在结肠癌药物抵抗中的驱动作用；同时，研究细胞中 Wnt/β-catenin、PI3K/Akt 等信号通路的活性，可解析结肠癌细胞逃避凋亡、维持恶性增殖的分子机制。抗肿瘤药物筛选与药物抵抗机制研究方面，RKO 细胞是评估结肠癌治疗药物疗效的关键工具 —— 在新型治疗药物或联合用药方案研发中，可通过体外梯度给药检测细胞活力、凋亡率及细胞周期分布，绘制剂量 - 效应曲线并计算 IC₅₀，筛选有效药物；此外，通过长期低剂量药物诱导构建 RKO 药物抵抗细胞株，对比敏感株与抵抗株的基因表达差异（如 ABC 转运蛋白上调、DNA 修复基因激活），解析抵抗机制，为开发抵抗逆转策略（如联合使用 ABC 转运蛋白抑制剂）提供实验依据。肿瘤微环境相互作用研究中，RKO 细胞可用于模拟结肠癌与微环境的 “交叉对话"—— 通过构建 Transwell 共培养体系（上室为 RKO 细胞，下室为结肠成纤维细胞或免疫细胞），观察微环境细胞分泌的细胞因子（如 IL-6、TGF-β）对 RKO 细胞增殖、侵袭及药物敏感性的影响；例如研究肿瘤相关成纤维细胞分泌的 IL-6 如何激活 RKO 细胞的 STAT3 通路，促进细胞药物抵抗，为靶向微环境的联合治疗提供理论基础。此外，该细胞还可用于结肠癌新型治疗方案研究，如评估特定靶向抑制剂对 RKO 细胞的杀伤增强效应，或构建相关细胞治疗模型，为治疗方案优化提供实验支撑。

不过，使用 RKO 人结肠癌细胞需注意其局限性。该细胞系仅代表中分化、野生型 p53 的结肠癌亚型，无法模拟低分化、p53 突变型或微卫星不稳定型结肠癌的生物学特征，研究不同亚型时需搭配对应细胞系（如 HCT116 细胞代表微卫星不稳定型）补充验证。作为单一细胞系，它无法wan全体现临床结肠癌的分子异质性（如患者间基因突变谱、药物代谢差异），实验结果需结合临床肿瘤样本（如组织芯片）进一步验证。此外，长期传代（超过 40 代）可能导致细胞出现恶性程度升高（如核异型性增强）或药物敏感性下降，需定期冻存早期传代细胞（如 P5-P10 代），并在实验前验证细胞的形态、标志物表达及药物应答能力，确保实验结果的可靠性与重复性。