上海乾思生物
生命科学产品一站式供应商
服务热线：021-34556080
生命科学产品一站式供应商
服务热线：021-34556080
产品型号：
更新时间：2025-10-29
厂商性质：代理商
访 问 量 ：786
021-34556080
相关文章
NCI-H295R人肾上腺皮质腺癌细胞
NCI-H295R人肾上腺皮质腺癌细胞是内分泌肿瘤研究领域中针对肾上腺皮质癌（ACC）的核心实验模型，源自人肾上腺皮质腺癌组织（罕见但恶性度高的内分泌肿瘤，年发病率约 0.7-2.0 / 百万），经体外分离、纯化及长期传代驯化建立。该细胞完整保留肾上腺皮质癌 “类固醇激素分泌功能活跃、增殖快、侵袭性强" 的核心病理特征，传代 40 代以内仍稳定维持激素合成相关分子表型，成为研究肾上腺皮质癌发病机制、激素分泌调控、抗肿瘤药物筛选及治疗敏感性评估的关键载体，为这一难治性内分泌肿瘤的科研突破与临床治疗方案优化提供重要支撑。
一、核心生物学特性
（一）组织来源与细胞属性
NCI-H295R 细胞源自临床肾上腺皮质腺癌患者的肿瘤组织，与体内肿瘤细胞的遗传背景、病理形态高度一致。其核心优势体现在三方面：一是功能特异性突出，可合成并分泌多种类固醇激素（如醛固酮、雄激素前体及其他糖皮质激素），精准模拟体内肾上腺皮质癌的内分泌功能异常，*激素分泌型肾上腺肿瘤模型的研究空白；二是分子特征明确，高表达肾上腺皮质特异性标志物（如 CYP11A1、SF-1），且存在 TP53 突变、CTNNB1 突变等高频遗传异常，与临床肾上腺皮质癌患者分子谱匹配，适合机制研究；三是培养稳定性强，体外以贴壁生长为主，增殖速率可控，无需复杂激素添加剂即可维持激素分泌功能，实验重复性达 90% 以上，满足大规模研究需求。
（二）形态与生长特征
体外培养时，NCI-H295R 细胞呈现典型肾上腺皮质癌细胞形态：细胞呈多边形或短梭形，排列紧密且具一定上皮样极性（模拟肾上腺皮质束状带细胞排列模式），胞质丰富且含大量嗜酸性颗粒（为类固醇激素合成相关的滑面内质网与脂滴，光学显微镜下呈细小点状聚集）；细胞核呈圆形或椭圆形，核质比中等，核仁清晰（1-2 个），染色质分布均匀，核分裂象较频繁（倍增时间约 72-96 小时，较其他肿瘤细胞稍慢，与肾上腺皮质细胞增殖特性一致），体现中高恶性增殖特性。
细胞生长无明显接触抑制，汇合度达 90% 后可继续增殖形成局部多层堆积；常规接种密度以 2×10⁴-3×10⁴ cells/cm² 为宜（因增殖速率慢，接种密度低于其他肿瘤细胞），接种后 36-48 小时开始贴壁，72 小时贴壁率超 90%，96-120 小时进入对数生长期，168 小时左右汇合度达 85%-90%，需及时传代避免过度密集导致激素分泌功能下降。
（三）分子表型与功能特性
分子层面，NCI-H295R 细胞呈现肾上腺皮质癌特异性表型：一是高表达肾上腺皮质标志物，如胆gu醇侧链裂解酶（CYP11A1，阳性率≥90%，激素合成关键酶）、类固醇生成因子 1（SF-1，阳性率≥85%，肾上腺发育与激素合成调控因子）、细胞角蛋白 18（CK18，阳性率≥80%），可通过免疫荧光、Western blot 精准鉴定细胞身份；二是激素合成相关分子异常活跃，高表达 3β- 羟基类固醇脱氢酶（3β-HSD）、17α- 羟化酶（CYP17A1）等激素合成关键酶，为类固醇激素分泌提供分子基础；三是存在典型遗传异常，TP53 基因突变率超 70%、CTNNB1（β- 连环蛋白）突变率约 40%，驱动肿瘤增殖与激素分泌异常。
功能上，该细胞具备两大核心特性：一是类固醇激素分泌功能，可合成并分泌盐皮质激素（醛固酮）、性激素前体（脱氢表雄酮）及其他糖皮质激素（分泌量约 20-30ng/10⁶cells/24h，显著高于正常肾上腺皮质细胞），模拟临床肾上腺皮质癌患者 “库欣综合征"“原发性醛固酮增多症" 等内分泌紊乱表现；二是恶性增殖与侵袭能力，体外 Transwell 实验中，细胞穿过基质胶的侵袭率达 35%-50%，软琼脂克隆形成实验中克隆形成率达 25%-35%，体现其恶性转化特性。
二、体外培养与操作规范
（一）基础培养体系配置
NCI-H295R 细胞对培养条件要求较高，需针对性配置培养基以维持激素分泌功能与恶性特征：
培养基选择：优先使用DMEM/F12 混合培养基（1:1 比例，含 15mM HEPES 缓冲液），该培养基可模拟肾上腺皮质细胞体内微环境，维持激素合成相关酶活性；若使用单一 RPMI-1640 培养基，需额外添加 1% 非必需氨基酸与 5μg/mL 胰岛素，否则 CYP11A1 表达会下降 40% 以上，激素分泌量减少 50%；
血清与添加剂：添加 2.5% 胎牛血清 + 2.5% 马血清混合血清（单独使用胎牛血清会抑制激素分泌，马血清可促进 SF-1 表达），加入 1% 抗菌试剂预防污染；需额外添加 5μg/mL 转铁蛋白（维持细胞铁代谢，保障激素合成），无需添加外源性激素，细胞可通过自分泌维持激素合成稳态；
培养环境：温度控制在 37℃±0.5℃，CO₂浓度维持 5%±0.2%，湿度保持 95%±2%，pH 稳定在 7.2-7.4，渗透压 280-320mOsm/kg；使用普通细胞培养瓶（无需涂层，细胞贴壁能力较强），建议每 3-4 天更换一次培养基（因增殖慢、营养消耗较缓），更换时沿培养瓶壁缓慢加入，避免冲刷损伤贴壁细胞与胞内脂滴。
（二）传代与功能维持操作
传代时机：当细胞汇合度达 85%-90% 或激素分泌量下降超 30% 时需及时传代（通常每 7-10 天一次），避免过度汇合导致细胞老化（表现为胞内脂滴减少、CYP11A1 表达下降）。传代比例按 1:2-1:3 稀释（因增殖速率慢，稀释比例低于其他肿瘤细胞），固定比例（如 1:2）可确保激素分泌功能稳定传递。
传代步骤：
弃去旧培养基，用无菌 PBS 轻柔冲洗细胞表面 2 次（动作缓慢，避免破坏胞内脂滴）；
加入含 0.02% EDTA 的消化液（25cm² 培养瓶加 1mL），37℃孵育 5-7 分钟（肾上腺皮质细胞贴壁力强，且胞质丰富，消化时间较长），显微镜下观察到细胞边缘收缩、间隙增大时，立即加入 2-3 倍体积含混合血清的培养基终止消化；
用移液器轻轻吹打培养瓶底部（力度适中，避免产生气泡破坏细胞），使细胞wan全脱落并分散为单个细胞，收集细胞悬液后离心（1000×g，5 分钟），弃上清后用新鲜培养基重悬，按预设比例接种至新培养瓶。
功能维持要点：长期传代易导致激素分泌功能下降与侵袭能力减弱，需每 6-8 代检测一次 CYP11A1、SF-1 表达（阳性率需分别≥85%、80%）与糖皮质激素分泌量（确保≥15ng/10⁶cells/24h）；若功能下降，可在培养基中添加 10nM 促肾上腺皮质激素（ACTH，激活激素合成信号通路）培养 48 小时，促进功能恢复；避免频繁更换血清批次，每次更换后需适应培养 3-4 代，待细胞增殖与激素分泌功能稳定后再用于实验。
（三）冻存与复苏要点
冻存准备：选择对数生长期、激素分泌正常的细胞（活力≥90%，糖皮质激素分泌量≥20ng/10⁶cells/24h），冻存液按 “10% DMSO+20% 混合血清（胎牛血清：马血清 = 1:1）+70% DMEM/F12 培养基" 配制，全程在冰浴中操作，DMSO 缓慢滴加并轻柔混匀，防止温度骤降导致细胞结冰损伤与胞内脂滴破裂。
冻存流程：将细胞消化为单细胞悬液后离心（1000×g，5 分钟），弃上清；用预冷冻存液重悬细胞，调整浓度为 1×10⁷-1.5×10⁷ cells/mL（因增殖慢，冻存浓度高于其他肿瘤细胞，确保复苏后可快速扩增），分装至冻存管；采用程序降温法：4℃放置 30 分钟→-20℃放置 1 小时→-80℃放置 24 小时→转入液氮长期保存，不可直接放入 - 80℃（易导致脂滴聚团结冰，破坏激素合成结构）。
复苏操作：从液氮取出冻存管后，立即放入 37℃水浴快速解冻（90-120 秒内wan全融化）；将细胞悬液缓慢加入 10 倍体积预热的含混合血清的培养基，轻轻混匀后离心（1000×g，5 分钟）去除 DMSO；用新鲜培养基重悬细胞并接种至培养瓶，培养 48 小时后更换培养基，去除死细胞与残留 DMSO；复苏后 72 小时细胞活力可恢复至 80% 以上，96 小时后需检测激素分泌量与标志物表达，确保功能无显著损伤，两周后可正常开展实验。
三、主要研究应用场景
（一）肾上腺皮质癌机制研究
NCI-H295R 细胞是解析肾上腺皮质癌恶性进展与激素分泌机制的核心工具：
激素分泌调控研究：通过 qPCR、Western blot 检测不同处理（如 ACTH、信号通路抑制剂）下 CYP11A1、CYP17A1 的表达变化，分析 cAMP/PKA、Wnt/β- 连环蛋白等信号通路对激素合成的调控；例如，抑制 Wnt 通路后，SF-1 表达量下降 45%，糖皮质激素分泌减少 50%，证实其对激素分泌的正向调控作用；
遗传异常功能研究：通过基因编辑修复 TP53 突变，对比修复前后细胞增殖、侵袭能力变化；修复 TP53 后，细胞倍增时间延长至 120 小时，侵袭率下降 40%，证实 TP53 突变的促癌作用。
（二）抗肿瘤与抗激素药物筛选
依托其激素分泌特性，NCI-H295R 细胞广泛用于肾上腺皮质癌药物研发：
抗肿瘤药物筛选：将候选药物与细胞共培养，通过 CCK-8 法检测增殖抑制率，计算 IC50 值；例如，某拓扑异构酶抑制剂对该细胞的 IC50 约 12-18nM，为临床用药剂量选择提供参考；
抗激素治疗药物研发：针对激素分泌异常，筛选可抑制类固醇激素合成的药物（如 CYP11A1 抑制剂），检测药物对糖皮质激素分泌的影响；例如，CYP11A1 抑制剂处理后，糖皮质激素分泌量下降 70%，且细胞增殖率下降 35%，实现 “抑制激素 + 抗肿瘤" 双重效果。
（三）内分泌紊乱与耐药机制研究
肾上腺皮质癌常伴随内分泌紊乱与治疗耐药，NCI-H295R 细胞是理想研究模型：
内分泌紊乱机制研究：检测细胞分泌的激素对其他器官细胞（如肝细胞、血管内皮细胞）的影响，模拟临床 “异位激素综合征"；例如，该细胞分泌的雄激素前体可促进前列腺癌细胞增殖，证实内分泌紊乱的跨器官影响；
耐药模型构建与逆转：长期低浓度药物诱导细胞构建耐药株，发现耐药株中 ABC 转运蛋白表达升高 10 倍，且 CYP17A1 表达异常增加（增强激素合成代偿）；添加 ABC 转运蛋白抑制剂后，耐药株对药物的 IC50 从 25μM 降至 9μM，敏感性显著恢复，为临床逆转耐药提供实验依据。
Copyright © 2025 上海乾思生物科技有限公司版权所有 备案号：沪ICP备2023041625号-1
技术支持：化工仪器网 管理登录 sitemap.xml
当前位置：
上一个：
返回列表
