OS-RC-2人肾癌细胞

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OS-RC-2人肾癌细胞源自人肾透明细胞癌组织，贴壁生长，具典型肾癌表型与侵袭转移潜能，是肾癌发病机制、药物筛选及耐药模型构建的重要实验模型。

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更新时间：2025-10-28

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OS-RC-2人肾癌细胞

OS-RC-2人肾癌细胞是肾癌基础研究与临床转化领域的重要细胞模型，源自人肾透明细胞癌组织，于临床手术标本中分离建立。该细胞完整保留了肾透明细胞癌的典型生物学特征，包括独特的形态表型、恶性增殖能力及强侵袭转移潜能，在肾癌发病机制解析、抗肿瘤药物筛选、耐药模型构建及转移机制研究中发挥关键作用，为肾癌研究提供了贴近临床病理特征的实验载体。

一、核心生物学特性

（一）来源与病理特征关联

OS-RC-2 细胞源自临床确诊的肾透明细胞癌患者手术标本，与该类型肾癌的临床病理特征高度匹配。细胞携带肾透明细胞癌常见的遗传学异常，如 VHL（von Hippel-Lindau）基因突变，这一突变导致缺氧诱导因子（HIF）降解受阻，进而引发 VEGF、PDGF 等促血管生成因子高表达，模拟了临床肾透明细胞癌 “血管丰富" 的病理特点。同时，细胞高表达肾透明细胞癌特异性标志物 —— 碳酸酐酶 IX（CAIX）与 CD10，其中 CAIX 阳性率达 90% 以上，可作为细胞身份鉴定及药物作用效果评估的重要指标，其表达水平与细胞增殖、侵袭能力呈正相关。

（二）形态与生长特性

体外培养时，OS-RC-2 细胞呈典型上皮样贴壁生长，无悬浮生长倾向。细胞形态为多边形或梭形，胞质丰富且因富含糖原与脂质而呈透明状，这是肾透明细胞癌的标志性形态特征；细胞核大而不规则，核仁明显（1-2 个），染色质分布不均，可见双核或多核细胞（约占 3%-5%），符合恶性肿瘤细胞的核型特点。细胞间连接松散，易形成局部密集的细胞克隆，当汇合度达到 85% 以上时，部分细胞会出现重叠生长，接触抑制现象较弱。

细胞增殖能力稳定，倍增时间约 36-48 小时，传代 40 代以内可维持稳定的生物学表型与增殖活性。接种密度以 2×10⁴-4×10⁴ cells/cm² 为宜，接种后 24 小时贴壁率达 80% 以上，36 小时进入对数生长期，72 小时可达到 80%-90% 汇合度，需及时传代以避免细胞过度密集导致形态改变与增殖速率下降。

（三）分子表型与功能特征

分子层面，OS-RC-2 细胞呈现肾透明细胞癌的典型分子特征：一是 VHL-HIF 通路异常激活，HIF-1α 与 HIF-2α 蛋白持续高表达，驱动下游 VEGF、GLUT1 等靶基因表达，促进细胞血管新生与糖代谢重编程，为细胞恶性增殖提供能量支持；二是表达多种侵袭转移相关蛋白，如基质金属蛋白酶（MMP-2、MMP-9）、E - 钙粘蛋白（E-cadherin）低表达，导致细胞黏附能力下降，侵袭与迁移能力显著增强，Transwell 实验中穿膜细胞数是正常肾小管上皮细胞的 5-8 倍；三是对多种肾癌治疗药物存在不同程度敏感性，如对舒尼替尼、索拉非尼等靶向药物的 IC₅₀值分别约为 2μM、5μM，同时具备形成耐药的潜力，是研究肾癌药物敏感性与耐药机制的理想模型。

二、体外培养与操作规范

（一）基础培养体系配置

OS-RC-2 细胞对培养条件要求适中，需精准控制营养成分与环境参数以维持其生物学特性：

培养基选择：优先使用RPMI-1640 培养基（含 25mM HEPES 缓冲液、1mM 丙酮酸钠、2mM L - 谷an酰胺），该培养基可满足细胞对氨基酸、能量物质的需求，其中 L - 谷an酰胺为细胞合成蛋白质与核酸提供关键前体，缺失会导致细胞增殖速率下降 50% 以上；

血清与添加剂：需添加 10%-12% 胎牛血清（需筛选低内毒素、高营养活性的批次，白蛋白含量≥30g/L），同时加入 1% 抗菌试剂预防细菌污染；无需额外添加生长因子，细胞可通过自分泌方式维持正常增殖；

培养环境：温度控制在 37℃±0.5℃，CO₂浓度维持 5%±0.2%，湿度保持 95%±2%，pH 稳定在 7.2-7.4，渗透压 280-320mOsm/kg；使用普通细胞培养瓶即可，无需特殊涂层（细胞贴壁能力强，可直接附着于塑料瓶壁），建议每 2-3 天更换一次培养基，避免代谢废物堆积影响细胞活性。

（二）传代与冻存操作

传代时机：当细胞汇合度达 80%-90% 时需及时传代（通常每 2-3 天一次），避免过度汇合导致细胞形态异常与功能改变；传代比例按 1:3-1:5 稀释，具体根据实验需求调整 —— 需维持细胞高活性时按 1:3 稀释，需大规模扩增时按 1:5 稀释。

传代步骤：

弃去旧培养基，用无菌 PBS 轻柔冲洗细胞表面 2 次（去除残留血清与代谢废物，避免影响消化效率）；

加入含 0.02% EDTA 的消化液（按每 25cm² 培养瓶加入 1mL 消化液的比例），37℃孵育 1.5-2.5 分钟，显微镜下观察到细胞边缘收缩、间隙增大，部分细胞开始脱落时，立即加入 2-3 倍体积的wan全培养基终止消化；

用移液器轻轻吹打细胞表面，使细胞wan全脱落并分散为单个细胞（力度适中，避免产生气泡损伤细胞），收集细胞悬液离心（1000×g，5 分钟），弃上清后用新鲜培养基重悬，按预设比例接种至新培养瓶。

冻存操作：

冻存准备：选择对数生长期、活力≥95% 的细胞，冻存液按 “10% DMSO+20% 胎牛血清 + 70% wan全培养基" 配制，全程在冰浴中操作，DMSO 缓慢滴加并不断轻柔混匀，防止温度骤降损伤细胞；

冻存流程：将细胞悬液离心（1000×g，5 分钟），弃上清后用预冷冻存液重悬，调整浓度为 6×10⁶-1×10⁷ cells/mL，分装至冻存管；采用程序降温法：4℃放置 30 分钟→-20℃放置 1 小时→-80℃放置 12 小时→转入液氮长期保存；

复苏操作：从液氮取出冻存管后，立即放入 37℃水浴快速解冻（40-60 秒内wan全融化），将细胞悬液缓慢加入 10 倍体积预热的wan全培养基，离心（1000×g，5 分钟）去除 DMSO，用新鲜培养基重悬后接种至培养瓶，培养 24 小时后更换培养基，去除死细胞与残留 DMSO，确保细胞活性恢复。

三、主要研究应用场景

（一）肾癌发病机制研究

OS-RC-2 细胞是解析肾透明细胞癌发病机制的核心工具：

VHL-HIF 通路研究：通过基因编辑技术（CRISPR/Cas9）修复细胞中的 VHL 基因突变，或敲除 HIF-1α/HIF-2α 基因，观察细胞增殖、血管新生相关因子（VEGF、PDGF）表达及葡萄糖代谢变化，明确 VHL-HIF 通路异常激活在肾透明细胞癌发生中的核心作用；同时筛选通路下游关键靶基因，验证其作为肾癌治疗靶点的可行性。

代谢重编程研究：检测细胞糖代谢（如葡萄糖摄取率、乳酸生成量）、脂质代谢相关酶（如脂肪酸合成酶 FASN）的活性与表达，研究肾透明细胞癌 “瓦伯格效应" 及脂质蓄积的分子机制；通过药物抑制关键代谢酶活性，观察细胞增殖抑制效果，探索肾癌代谢靶向治疗策略。

（二）抗肿瘤药物筛选与评估

该细胞是肾癌药物体外筛选与体内验证的重要模型：

体外药物筛选：将候选药物（如靶向药物、hua疗药物、中药提取物）与 OS-RC-2 细胞共培养，通过 CCK-8 法检测细胞增殖抑制率，流式细胞术检测细胞凋亡率，Transwell 实验检测细胞侵袭能力变化；对有效药物，进一步通过 Western blot 检测通路相关蛋白（如 HIF-1α、VEGF、MMP-9）表达，明确药物作用机制；

体内药物评估：利用 OS-RC-2 细胞构建裸鼠皮下移植瘤模型（接种 5×10⁶个细胞 / 只），待肿瘤体积达 100-150mm³ 时，将裸鼠随机分组并给予候选药物，通过监测肿瘤体积变化、裸鼠存活时间评估药物体内疗效；同时检测肿瘤组织中 CAIX 表达、微血管密度（CD31 染色）及凋亡指数（TUNEL 染色），全面评价药物对肿瘤生长与血管新生的抑制作用。

（三）肾癌转移与耐药模型研究

依托其强侵袭转移潜能与药物敏感性特征，OS-RC-2 细胞可用于肾癌转移与耐药研究：

转移模型构建与机制研究：通过 Transwell 小室筛选高侵袭亚群（OS-RC-2/M），对比亲本株与高侵袭亚群的基因表达差异（如 MMPs、黏附分子）；构建裸鼠肺转移模型（尾静脉注射 2×10⁶个细胞），通过活体成像技术追踪肿瘤转移过程，研究转移相关基因（如 Twist、Snail）的功能；

耐药模型构建与逆转研究：通过逐步提高药物浓度（如舒尼替尼从 0.5μM 逐步提升至 5μM）诱导 OS-RC-2 细胞产生耐药性，建立耐药细胞株（OS-RC-2/SUN）；对比亲本株与耐药株的 ABC 转运蛋白（如 ABCG2）、HIF 通路活性差异，筛选可逆转耐药的药物或小分子化合物，为临床肾癌耐药患者的治疗提供实验依据。

上一个：ANTI DEAMIDATED GLIADIN PEPTIDE （DGP）