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更新时间:2025-10-14
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人胚肺转化细胞
人胚肺转化细胞是从胚胎发育阶段(通常为孕 12-18 周)的肺组织中分离原代细胞后,经体外诱导转化获得的永生化细胞群体,因兼具肺细胞功能特性与稳定增殖能力,成为肺部疾病机制研究、病毒学实验及药物安全性评价的重要工具细胞。这类细胞在形态上呈现肺上皮细胞与间质细胞的混合特征:上皮亚型细胞呈多边形或立方状,贴壁培养时紧密排列形成单层上皮样群落,细胞边界清晰,胞质中可见较多分泌颗粒(模拟肺上皮的分泌功能);间质亚型细胞则呈梭形,呈放射状贴壁生长,胞质均匀,细胞核呈椭圆形且位于细胞中央。两类细胞均保留部分肺组织特异性标志物,如上皮亚型表达细胞角蛋白 18(CK18)、表面活性物质相关蛋白(SP-A),间质亚型表达波形蛋白(Vimentin),这些标志物是其功能特性的重要体现。
从细胞转化与制备流程来看,胚胎肺转化细胞的获取需经历原代分离与体外转化两个关键阶段:首先在无菌条件下取出胚胎肺组织,去除肺周结缔组织与血管,将肺组zhi剪碎为 1-2mm³ 的组织块,用含 EDTA 的细胞解离液在 37℃孵育 25-35 分钟,解离细胞间连接;通过离心收集单细胞悬液,用含胎牛血清的 DMEM/F12 培养基重悬,接种于培养皿进行原代培养,获得原代人胚肺细胞;随后通过病毒转化(如 SV40 病毒 T 抗原转染)或化学诱导(如添加甲基胆蒽)的方式,诱导原代细胞发生永生化转化 —— 病毒转化可通过外源基因整合到细胞基因组,抑制细胞衰老相关基因表达,使细胞获得无限增殖能力;化学诱导则通过改变细胞遗传物质,打破正常增殖周期调控。转化后需通过筛选获得增殖稳定、功能保留的细胞克隆,再经多次传代纯化,最终建立可长期使用的细胞系(如常用的 WI-38 VA13 细胞系)。
在核心生物学特性方面,这类细胞的优势集中体现在 “永生化增殖"“肺功能保留" 与 “培养稳定性" 三大维度。永生化增殖是其zui显著的特征 —— 相较于原代人胚肺细胞(仅能传代 5-8 代),转化后的细胞可长期传代培养(超过 100 代仍维持稳定增殖),且增殖周期稳定(约 24-36 小时 / 代),无需频繁获取原代组织,大幅降低实验成本与操作难度;肺功能保留则体现在其能模拟肺组织的部分核心功能:上皮亚型细胞可分泌黏液样物质与表面活性物质,模拟肺上皮的防御与气体交换辅助功能;间质亚型细胞可分泌细胞外基质成分(如胶原纤维),模拟肺间质的支撑功能;同时,两类细胞对多种呼吸道病毒(如流感病毒、呼吸道合胞病毒、新guan病毒)具有敏感性,病毒感染后可出现典型的细胞病变效应(CPE),为病毒分离与鉴定提供理想宿主。
体外培养条件方面,胚胎肺转化细胞对环境要求较为温和:基础培养基选用含 10%-15% 胎牛血清的 DMEM 或 MEM 培养基,添加表皮生长因子(EGF)促进细胞增殖,添加胰岛素 - 转铁蛋白 - 硒(ITS)增强细胞代谢活性,同时加入微生物污染防控试剂预防污染;培养环境需控制在 37℃恒温、5% CO₂浓度、95% 以上湿度,避免温度波动或 CO₂浓度异常影响细胞活性;传代时使用温和的细胞消化液,消化时间控制在 2-3 分钟,待细胞收缩变圆后立即终止消化,防止过度损伤;培养过程中需定期检测细胞的病毒敏感性与功能标志物表达(如 SP-A、Vimentin),确保细胞功能稳定,若发现功能显著下降,需及时启用冻存的早期代次细胞。
在科研与产业应用价值上,这类细胞的应用场景覆盖多个关键领域:肺部疾病研究领域,可用于构建疾病模型 —— 如通过基因编辑技术构建肺纤维化相关细胞模型(如过表达 TGF-β 基因),观察细胞外基质过度沉积过程,解析疾病发病机制;也可用于研究哮喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)的细胞层面变化,为疾病治疗靶点筛选提供依据。病毒学研究领域,是病毒分离、培养与鉴定的核心工具 —— 临床样本中分离的呼吸道病毒,可接种到这类细胞中进行培养扩增,通过观察 CPE 判断病毒存在,再结合免疫学方法(如免疫荧光染色)进行病毒分型,为病毒感染的诊断与防控提供支持;同时,也可用于病毒复制机制研究,通过检测病毒在细胞内的增殖曲线与基因表达,分析病毒与宿主细胞的相互作用。药物研发领域,可作为药物肺毒性检测与疗效评价的模型 —— 通过检测药物对细胞活性、肺功能标志物(如 SP-A)表达及炎症因子(如 IL-6、TNF-α)分泌的影响,评估药物对肺部的潜在毒性;也可用于抗呼吸道病du药物筛选,检测药物对病毒复制的抑制效果,为抗病du药物研发提供数据支持。此外,在生物制药领域,这类细胞也可用于疫苗生产的辅助研究,如评估疫苗候选株在细胞中的增殖效率,为疫苗生产工艺优化提供参考。
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