RH-35大鼠肝癌细胞自大鼠肝癌组织，呈上皮样贴壁生长，具恶性增殖与肝相关功能特征，是肝癌发病机制、肝损伤关联肿瘤及抗肿瘤药物筛选的常用模型。​

RH-35大鼠肝癌细胞

RH-35大鼠肝癌细胞是肝癌基础研究与肝损伤关联肿瘤机制探索的重要模型，源自化学致癌物诱导的大鼠肝癌组织，经原代分离、体外克隆筛选及功能验证建立。作为兼具肝癌细胞恶性特征与肝细胞部分生理功能的特殊细胞系，它既解决了原代肝细胞体外存活时间短、难以模拟肿瘤进程的问题，又保留了肝脏特异性代谢功能，能精准复现 “肝损伤 - 癌变" 过程中的关键生物学变化，成为研究肝癌发病机制（尤其肝损伤相关癌变）、肝脏代谢与肿瘤关联及抗肿瘤药物筛选的理想工具，广泛应用于肿瘤学、肝脏病学交叉研究及肝癌治疗策略研发等领域。

从生物学特性来看，RH-35 细胞呈现 “肝癌恶性属性 + 肝细胞功能特征" 的双重优势。光学显微镜下，细胞呈多边形或短梭形的上皮样形态，贴壁生长时排列紧密却极性紊乱，部分区域可见细胞堆叠（体现肿瘤细胞无序增殖特征）；胞质丰富，部分细胞胞质内可见细小颗粒（为肝脏代谢相关细胞器，如线粒体、内质网），偶见脂滴样结构（保留肝细胞脂质代谢能力）；细胞核呈圆形或椭圆形，位于细胞中央或偏位，染色质分布不均，核仁明显且数量增多（多为 2-3 个），偶见双核细胞，核异型性程度符合中分化肝癌的病理特征，既体现肿瘤细胞的恶性形态，又保留肝细胞的部分结构特征。功能层面，其核心价值在于两大特性：一是肝脏特异性代谢功能，能表达肝细胞标志性酶（如谷丙转氨酶 ALT、谷草转氨酶 AST），且具备尿素合成、药物代谢相关酶（如 CYP450 家族部分亚型）的活性，可模拟肝脏对物质的代谢过程，为研究肝癌细胞代谢异常及药物肝毒性提供基础；二是肝损伤关联的恶性特征，在模拟肝损伤刺激（如酒精、高脂、炎症因子）下，细胞会表现出增殖速率加快、侵袭能力增强（Transwell 实验穿膜细胞数较正常培养组增加 40%-60%）、抗凋亡蛋白（如 Bcl-2）表达上调的特征，wan美复现肝损伤促进癌变进展的病理过程。生长特性上，细胞为贴壁依赖性生长，最适培养条件为 37℃、5% CO₂恒温恒湿环境，pH 维持在 7.2-7.4；增殖速率较快，倍增时间约为 36-48 小时，对数生长期细胞密度可达 3.5×10⁵-5.5×10⁵个 /cm²，无明显接触抑制特性，当细胞融合度达到 80% 时需及时传代，避免过度堆积导致代谢功能下降。

在培养操作与质量控制层面，RH-35 细胞的培养需重点关注 “维持肝脏代谢功能与恶性表型"，避免因培养条件不当导致功能退化。培养基选择上，常规使用含 10% 胎牛血清的 DMEM 高糖培养基，并添加 1% 非必需氨基酸（如丙an酸、甘an酸）—— 非必需氨基酸可补充肝脏代谢所需底物，维持细胞的尿素合成等功能；血清需经过支原体检测与肝癌细胞兼容性验证，确保无有害微生物且不含影响肝脏代谢的外源因子。培养操作时，可使用普通塑料培养皿（细胞贴壁能力较强），但需避免频繁更换培养环境，减少机械刺激对细胞代谢酶活性的影响；传代流程需精准控制：先用无菌 PBS 缓冲液轻柔冲洗细胞表面 2-3 次，去除残留培养基与代谢废物，加入 0.25% 含 EDTA 的细胞消化液，37℃孵育 2-3 分钟，待显微镜下观察到细胞边缘收缩、间隙增大时，立即加入含血清的培养基终止消化，用移液器轻柔吹打形成单细胞悬液（避免过度吹打破坏代谢相关细胞器），按 1:4-1:6 的比例接种至新培养皿，24 小时内即可完成贴壁与增殖启动。质量控制需增加 “代谢功能验证" 维度：通过生化检测试剂盒测定细胞培养上清中 ALT、AST 活性及尿素含量，确保代谢功能稳定；通过免疫细胞化学染色验证肝癌标志物（如甲胎蛋白 AFP、细胞角蛋白 19 CK19）的阳性表达率（AFP 阳性率需≥60%），确认恶性表型；通过台盼蓝染色确保细胞活力≥90%，避免活力下降影响代谢与增殖功能检测结果。

在科研应用领域，RH-35 细胞凭借 “代谢功能完整 + 肝损伤癌变模拟能力" 的优势，在肝癌研究中发挥不可替代的作用。肝损伤关联肝癌机制研究是其核心应用场景 —— 科研人员可通过该细胞解析 “肝损伤 - 癌变" 的分子机制：例如用酒精（50-100mmol/L）长期刺激细胞，观察细胞增殖、侵袭能力变化及癌变相关基因（如 Myc、Ras）的表达差异，明确酒精性肝损伤促进肝癌进展的关键通路；同时，研究高脂环境下细胞脂质代谢异常与肿瘤恶性程度的关联，可为非酒精性脂肪肝相关肝癌的机制研究提供实验依据。肝癌代谢机制与靶向治疗研究方面，RH-35 细胞是探索肝癌代谢脆弱点的理想工具 —— 通过检测细胞对葡萄糖、谷an酰胺的依赖程度，结合代谢组学分析，筛选肝癌细胞te有的代谢异常通路（如谷an酰胺成瘾）；针对这些通路开发靶向药物（如谷an酰胺酶抑制剂），并在该细胞模型上验证药物对细胞增殖的抑制效果，为肝癌代谢靶向治疗提供新方向。抗肿瘤药物筛选与肝毒性评估中，细胞具备 “双重检测价值"：一方面可作为肝癌细胞模型，通过 CCK-8 法、凋亡检测等评估药物的抗肿瘤活性；另一方面可利用其肝脏代谢功能，检测药物对细胞 ALT、AST 活性及尿素合成的影响，同步评估药物的肝毒性风险，减少后续动物实验的盲目性。此外，细胞还可用于肝癌微环境研究，通过构建 Transwell 共培养体系（上室为 RH-35 细胞，下室为肝星状细胞），观察肝纤维化微环境对肝癌细胞增殖、侵袭的促进作用，为肝纤维化与肝癌协同治疗提供数据支撑。

不过，使用 RH-35 细胞需注意其局限性。该细胞系源自化学诱导肝癌，仅能模拟特定诱因（如化学致癌物）导致的肝癌，无法wan全代表临床中病毒（如乙肝病毒）、遗传因素相关肝癌的生物学特征，研究不同类型肝癌时需搭配对应模型（如 HBV 转基因小鼠肝癌细胞）补充验证。细胞的肝脏代谢功能虽保留，但部分关键酶（如 CYP450 家族主要亚型）活性低于正常肝细胞，研究药物肝代谢时需结合原代肝细胞或人体肝细胞模型进一步验证。此外，长期传代（超过 40 代）可能导致细胞代谢酶活性下降或恶性程度异常升高，需定期冻存早期传代细胞（如 P5-P10 代），并在实验前通过代谢功能检测与恶性表型验证，确保细胞特性稳定，避免因功能改变影响实验结果的可靠性与重复性。