PC 61 5.3杂交瘤细胞CD25

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PC 61 5.3杂交瘤细胞CD25单克隆抗体分泌细胞，可特异性结合 CD25 分子，适用于免疫检测、免疫抑制研究及 CD25 相关疾病机制探索。

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更新时间：2025-10-28

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PC 61 5.3杂交瘤细胞CD25

PC 61 5.3杂交瘤细胞CD25是一种经细胞融合技术构建的鼠源杂交瘤细胞系，核心功能是稳定分泌抗 CD25 单克隆抗体（抗白细胞介素 - 2 受体 α 链，IL-2Rα）。该细胞兼具骨髓瘤细胞的无限增殖能力与 B 淋巴细胞的特异性抗体分泌功能，其分泌的抗体可高度特异性结合 CD25 分子，成为免疫检测、免疫调控机制研究及 CD25 相关疾病模型构建的关键工具，广泛应用于免疫学、肿瘤学及临床前研究领域。

一、核心生物学特性

（一）细胞来源与本质

PC 61 5.3 杂交瘤细胞由小鼠骨髓瘤细胞（通常为 SP2/0 或 NS-1 细胞株）与免疫小鼠的脾脏 B 淋巴细胞融合产生：首先用重组 CD25 蛋白或表达 CD25 的细胞免疫 BALB/c 小鼠，待小鼠产生特异性免疫应答后，取其脾脏分离 B 淋巴细胞，再与骨髓瘤细胞通过聚乙二醇（PEG）或电融合技术融合；融合后的细胞经含氨基蝶呤、胸腺嘧啶的筛选培养基处理，淘汰未融合的亲本细胞，最终通过有限稀释法克隆化培养，获得能稳定分泌抗 CD25 抗体的单克隆细胞株，即 PC 61 5.3 杂交瘤细胞。

（二）靶向分子 CD25 的特性关联

CD25 分子是白细胞介素 - 2 受体（IL-2R）的 α 链，主要表达于活化的 T 淋巴细胞（尤其是调节性 T 细胞 Treg）、B 淋巴细胞、自然杀伤（NK）细胞及部分肿瘤细胞表面（如急性淋巴细胞白血病、肾细胞癌等）。PC 61 5.3 细胞分泌的抗体可特异性识别 CD25 分子的胞外功能区，通过竞争性结合阻断 IL-2 与 CD25 的相互作用，进而抑制 IL-2 介导的免疫细胞活化、增殖信号通路；同时，该抗体也可通过抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用（ADCC）或补体依赖的细胞毒性作用（CDC），清除表面表达 CD25 的靶细胞，这一特性使其兼具 “免疫调控" 与 “靶向杀伤" 双重功能。

（三）细胞形态与增殖特征

PC 61 5.3 杂交瘤细胞在体外培养时呈悬浮或半贴壁生长状态，形态为圆形或椭圆形，细胞大小较均一（直径约 10-15μm），胞质丰富，细胞核呈圆形居中，核仁清晰可见。增殖能力稳定，倍增时间约 18-24 小时，在适宜培养条件下可长期传代（50 代以内表型无显著漂移）。细胞对营养条件要求较高，需在含血清的培养基中生长，且对渗透压、pH 值敏感 —— 适宜 pH 范围为 7.2-7.4，渗透压为 280-320mOsm/kg，偏离此范围会导致细胞增殖速率下降、抗体分泌量减少。

（四）抗体分泌特性

该细胞分泌的抗 CD25 抗体为IgG1 亚型，抗体分泌量稳定（约 5-10μg/10⁶细胞 / 24h），可通过酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫印迹（Western blot）或流式细胞术（FCM）检测。分泌的抗体特异性ji强，仅与 CD25 分子结合，不与 IL-2R 的 β 链（CD122）、γ 链（CD132）或其他细胞表面分子交叉反应；抗体亲和力高（解离常数 Kd 通常为 10⁻⁹-10⁻¹⁰mol/L），可在体外实验或体内动物模型中高效结合靶细胞表面的 CD25，为后续功能研究提供可靠的靶向工具。

二、体外培养与抗体制备

（一）基础培养条件

培养基选择：常规培养采用RPMI-1640 培养基，添加 10%-15% 胎牛血清（需经热灭活处理，56℃ 30 分钟，以去除补体成分）及抗菌试剂（预防细菌污染）；若需大规模培养或提升抗体分泌量，可使用无血清杂交瘤专用培养基，添加胰岛素、转铁蛋白等营养因子，减少血清成分对抗体纯化的干扰。

培养环境：需在 37℃、5% CO₂、95% 湿度的培养箱中培养，CO₂浓度需精准控制 —— 浓度过低会导致培养基 pH 升高，细胞易出现胞质空泡；浓度过高则会使 pH 降低，抑制细胞增殖。

传代操作：当细胞密度达到 2×10⁶-5×10⁶ cells/mL 时需及时传代，传代比例为 1:5-1:10，采用离心法（1000×g 离心 5 分钟）收集细胞，弃去旧培养基，用新鲜培养基重悬后接种至新培养瓶；避免细胞密度过高（超过 1×10⁷ cells/mL），否则会因营养耗尽、代谢废物积累导致细胞凋亡率升高。

（二）抗体纯化流程

若需获得高纯度的抗 CD25 抗体，可通过以下步骤纯化：

上清收集：将处于对数生长期的 PC 61 5.3 细胞接种至大规模培养瓶或生物反应器，培养 3-5 天后，收集细胞培养上清（通过 0.22μm 滤膜过滤，去除细胞碎片）；

粗纯化：采用蛋白 A 或蛋白 G 亲和层析柱，利用 IgG1 抗体与蛋白 A/G 的特异性结合，将抗体从培养上清中捕获 —— 用 pH 7.4 的磷酸盐缓冲液（PBS）平衡层析柱，上样后用同样缓冲液冲洗去除杂蛋白，再用 pH 3.0-3.5 的柠檬酸缓冲液洗脱抗体，洗脱液立即用 1mol/L Tris-HCl（pH 8.0）中和至中性；

精纯化：通过离子交换层析（如 DEAE - 纤维素柱）或凝胶过滤层析（如 Sephadex G-200 柱）进一步去除残留杂蛋白、内毒素，最终获得纯度≥95% 的抗 CD25 单克隆抗体；

抗体鉴定：通过 SDS-PAGE 检测抗体纯度，ELISA 检测抗体效价，流式细胞术验证抗体与 CD25 阳性细胞的结合活性，确保纯化后的抗体符合实验需求。

（三）冻存与复苏要点

冻存操作：选择对数生长期、活力≥95% 的细胞进行冻存 —— 离心收集细胞，用含 10% 二甲基亚砜（DMSO）、20% 胎牛血清的 RPMI-1640 培养基重悬，调整细胞浓度为 1×10⁷-2×10⁷ cells/mL，分装至冻存管；采用梯度降温法冻存：4℃放置 30 分钟→-20℃放置 1 小时→-80℃放置过夜→转入液氮长期保存，DMSO 可减少冻存过程中冰晶对细胞的损伤，20% 血清可提供营养保护。

复苏操作：从液氮中取出冻存管，立即放入 37℃水浴中快速解冻（1-2 分钟内wan全融化），避免 DMSO 长时间处于液态对细胞产生毒性；解冻后将细胞悬液缓慢加入 10 倍体积的预热培养基中，轻轻混匀，1000×g 离心 5 分钟，弃去上清（去除残留 DMSO），用新鲜培养基重悬后接种至培养瓶；复苏后 24 小时内更换一次培养基，去除死亡细胞，培养 48-72 小时后观察细胞活力，通常复苏存活率可达 80% 以上，恢复培养 2-3 代后细胞增殖与抗体分泌能力即可稳定。

三、主要研究应用场景

（一）CD25 分子的免疫检测与定位

流式细胞术检测：将 PC 61 5.3 细胞分泌的抗体标记荧光素（如 FITC、PE），作为流式细胞术的检测抗体，可快速定量分析外周血、脾脏或淋巴结中 CD25 阳性细胞（如 Treg 细胞）的比例与数量，用于评估机体免疫活化状态或疾病状态下的免疫细胞变化（如肿瘤患者外周血 Treg 细胞比例升高）；

免疫组化与免疫荧光定位：用该抗体作为一抗，通过免疫组化（IHC）或免疫荧光（IF）技术，可在组织切片中定位 CD25 阳性细胞的分布 —— 如在肿瘤组织中检测 CD25 阳性的免疫抑制细胞或肿瘤细胞，在炎症组织中观察 CD25 阳性 T 细胞的浸润情况，为疾病病理机制研究提供直观依据；

Western blot 与 ELISA 检测：通过 Western blot 检测细胞或组织中 CD25 蛋白的表达水平，通过 ELISA 检测体液中可溶性 CD25（sCD25）的含量（如自身免疫病患者血清 sCD25 升高），辅助疾病诊断与病情评估。

（二）免疫调控机制研究

Treg 细胞功能抑制：Treg 细胞表面高表达 CD25，PC 61 5.3 抗体可通过结合 CD25 阻断 IL-2 信号，抑制 Treg 细胞的增殖与免疫抑制功能 —— 在体外实验中，加入该抗体可解除 Treg 细胞对效应 T 细胞（Teff）的抑制，促进 Teff 细胞的活化与增殖；在体内动物模型中，注射该抗体可减少 Treg 细胞数量，增强抗肿瘤相关免疫或抗感染免疫，为研究 Treg 细胞的免疫调控作用提供关键工具；

IL-2 信号通路研究：IL-2 与 CD25 的结合是 IL-2 信号通路激活的关键步骤，该抗体可特异性阻断这一过程，用于解析 IL-2 信号通路对免疫细胞（T 细胞、B 细胞、NK 细胞）活化、增殖与分化的调控机制 —— 如通过对比加药组与对照组细胞的磷酸化蛋白水平（如 STAT5 磷酸化），明确 IL-2 信号通路下游分子的激活规律。

（三）CD25 相关疾病模型构建与药物筛选

肿瘤相关研究：部分肿瘤细胞（如肾细胞癌、黑色素瘤）表面表达 CD25，PC 61 5.3 抗体可通过 ADCC/CDC 效应靶向杀伤这些肿瘤细胞，同时通过抑制 Treg 细胞增强抗肿瘤相关免疫 —— 可在小鼠肿瘤模型（如 B16 黑色素瘤模型、Renca 肾癌模型）中注射该抗体，观察肿瘤生长情况与小鼠存活时间，评估其对肿瘤的作用效果，为 CD25 靶向的肿瘤相关药物研发提供前期数据；

自身免疫病模型研究：在自身免疫病（如实验性自身免疫性脑脊髓炎 EAE、类风湿关节炎 RA）小鼠模型中，Treg 细胞功能异常或 CD25 表达异常是疾病发生的重要因素 —— 注射 PC 61 5.3 抗体可调节 Treg 细胞功能或清除 CD25 阳性免疫细胞，观察疾病症状的改善或加重情况，探索 CD25 在自身免疫病中的作用，筛选针对 CD25 的治疗药物；

移植相关免疫研究：在移植物相关模型（如皮肤移植物、心脏移植物模型）中，CD25 阳性 T 细胞（尤其是活化的效应 T 细胞）参与移植物排斥反应，而 Treg 细胞则可诱导免疫耐受 —— 使用 PC 61 5.3 抗体可通过清除活化 T 细胞或调节 Treg 细胞功能，延长移植物存活时间，研究移植物排斥与耐受的机制，为移植物相关免疫调控药物的研发提供实验基础。

四、实验操作的核心注意事项

细胞污染防控：杂交瘤细胞对支原体、细菌、真菌污染极为敏感，污染后会导致细胞增殖停滞、抗体分泌量骤降甚至细胞死亡 —— 需定期（每传代 3-5 次）通过 PCR 法检测支原体，培养过程中严格遵守无菌操作规范，培养基中添加适宜抗菌试剂；若发现细胞污染，需立即丢弃污染细胞，对培养环境进行消毒，避免污染扩散。

抗体特异性验证：在使用该细胞分泌的抗体进行实验前，需通过阴性对照验证抗体特异性 —— 如用 CD25 敲除小鼠的细胞或 CD25 阴性细胞系（如 Jurkat 细胞未活化状态）作为阴性对照，确保抗体仅与 CD25 阳性细胞结合，避免因交叉反应导致实验结果误判；同时需通过阳性对照（如活化的 T 细胞）验证抗体活性，确保抗体功能正常。

细胞状态与抗体分泌稳定性监测：长期传代过程中，细胞可能出现 “抗体分泌沉默" 现象（因染色体丢失导致抗体基因表达下降）—— 需定期（每 10 代）检测细胞的抗体分泌量（如 ELISA 检测培养上清），同时观察细胞形态与增殖速率，若发现抗体分泌量下降超过 50% 或细胞形态异常，需及时复苏早期冻存的细胞，确保实验材料的稳定性。

体内实验的安全性控制：在动物体内使用该抗体时，需注意抗体的鼠源特性可能引发的免疫反应 —— 如多次注射可能导致动物产生抗鼠抗体（HAMA 反应），影响后续实验效果；建议根据实验需求选择合适的抗体剂量（通常为 100-200μg / 只小鼠），并设置同型对照抗体（如鼠 IgG1）组，排除抗体 Fc 段非特异性作用对实验结果的影响。

上一个：SAC-Ⅱb2小鼠腹水瘤细胞