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Emfret Analytics

更新时间:2021-10-29

简要描述:

Emfret Analytics 专注于生物医学研究中单克隆抗体的生产、表征、衍生化和供应。

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Emfret Analytics GmbH(成立于 2002 年)专注于生物医学研究(即血管生物学)中单克隆抗体的生产、表征、衍生化和供应。


Emfret Analytics

免疫组化(用丙酮固定的冰冻切片)

请注意:不建议对(对)甲醛固定的样品进行免疫染色,因为在这些条件下,大多数大鼠抗体在小鼠组织上只能产生较差的结果。


  1. 将冷冻组织的切片安装在载玻片上,并在 4°C 的冰冷 100% 丙酮中固定 20 分钟。在室温下干燥样品过夜。

  2. 为了尽量减少试剂体积,可以用防水笔在载玻片上的组织部分周围画一个疏水环。在接下来的所有程序中,这个被包围的区域不应干涸。因此,建议在潮湿的盒子中进行孵化步骤。

  3. 在 PBS 中孵育幻灯片 20 分钟。

  4. 当使用过氧化物酶偶联的二抗时,在室温下用 0.03% H2O2 孵育载玻片 10 分钟以抑制内源性过氧化物酶活性。在 PBS 中冲洗载玻片 3 次,每次 5 分钟。

  5. 将玻片在室温下在封闭溶液(来自待使用的二抗宿主物种的血清)中孵育 1 小时,在 PBS 中稀释 1:10 或 1:100。

  6. 用封闭溶液中的一抗 (2-10 µg/ml) 覆盖载玻片,并在室温下孵育 2 小时。

  7. 从载玻片上吸干多余的液体,并在 PBS 中冲洗 3 次,每次冲洗 5 分钟。

  8. 根据制造商的说明,用在封闭溶液中稀释的荧光团或过氧化物酶偶联的二抗(例如亲和纯化的驴抗大鼠 IgG-FITC 或 -HRP,Jackson ImmunoResearch,West Grove,PA)覆盖载玻片。在 RT 中孵育 1 小时。

  9. 从载玻片上吸干多余的液体,并在 PBS 中冲洗 3 次,每次冲洗 5 分钟。

  10. a) 荧光染色的样品可以通过荧光显微镜直接分析。

  11. b) 为了观察过氧化物酶标记的结构,用新鲜制备的 3-氨基-9-乙基咔唑 (AEC) 底物盖住载玻片并孵育直至在显微镜下可见红色染色,时间可在 5 到 30 分钟之间变化。在橙色背景染色发生之前用去离子水冲洗停止反应。对于复染,用苏木精孵育样品 30-240 秒,并用流动的温水冲洗载玻片 20 分钟。使用包埋水溶液(例如 Aquatex、Merck)安装切片。


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