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ATCC细胞培养之换液与消化传代
更新时间:2014-04-11   点击次数:2362次

ATCC细胞培养之换液与消化传代

ATCC即美国模式培养物集存库(American type culture collection)的简写。ATCC向发布其获取、鉴定、保存及开发的生物标准品,推动科学研究的验证、应用及进步。上海乾思生物专业经营进口ATCC细胞,GIBCO血清,Abcam抗体,GE试剂等等科研产品,为你助力。

ATCC细胞有29,000多种不同品系。以下为网上收集来的,细胞实验技巧。

1、细胞复苏,养细胞不要循规蹈矩,书上说的是经典,但有时也需要灵活运用。一般要求37℃复苏细胞,但使用39℃,融化了就马上把细胞拿走,细胞不会升温到37℃以上,这样复苏的时间更短,细胞受的伤害更小,有利于提高细胞存活率。

2、复苏好的细胞是否要离心去除保护剂,要看你的细胞是不是对保护剂敏感,一般是不离心的,直接放到培养皿里,加入新鲜培养液,待细胞贴壁后换培养液就行了,其实对细胞的处理过程越简单,对细胞的损伤就越小。

3、关于培养液中是否要加双抗。开始养细胞时是加的,后来发现基本没有用。该污染的还是污染。而且双抗对细胞有毒性,如果细胞很脆弱,要尽量减少对它的伤害。

4、关于污染。防止污染要从良好的无菌操作做起。国内一般使用酒精灯燎烧,其实用酒精灯很危险,而且未必能起到烧死细菌的作用,如果烧的时间短,物品表面跟本烧不热,也烧不死细菌,烧时间长了容易把物品烧坏,而且容易烧到自己。在国外一般是不允许用酒精灯的。所谓的基本无菌操作就是主要那几条,如不要在打开的容器上方运动,不要过早打开容器,取物品要小心不要触及其他等等,还有一个zui重要的:手上要干净,操作时可以经常用酒精喷一下,这点很关键。

5、关于污染后的救治。如果细胞不是很重要,发现污染就及时扔掉!否则容易污染到培养箱里其他细胞,甚至整个细胞房都会有污染源。平时要养成及时冻存的习惯。对于细胞培养液中经常出现的小黑点,数量少一般不会影响实验,如果数量很多,可以使用环丙沙星或诺氟沙星等,很便宜,加入一点点就可以了,连续使用一个礼拜细胞会很干净。

6、关于换液。如果细胞很脆弱,可以采用一次只换一半培养液的方法,如果细胞分裂很旺盛,每次可以全换掉。

7、关于消化传代。消化一定不要太过,不然对细胞影响很大。消化前使用PBS先洗一遍,可以缩短消化时间,细胞很容易就能消化掉了。

8、关于冻存。用棉花包起来,然后直接放到-20℃,半小时后转-70℃,过一夜转液氮罐。

ATCC细胞目录:HO8910细胞、B16-F10细胞、Tca8113细胞、OVCA433细胞,ACHN细胞、Caov-3细胞、NCI-H157细胞、QBC939细胞、BIU87细胞、HCT-8/vCR细胞、Hut-102细胞、AAv-293细胞、RKO-E6细胞、FIP293细胞、HCC827细胞、HBZY-1细胞、NCI-H358细胞、HCCC-9810细胞、Acc-2细胞、QG-56细胞、HBL-100细胞、K562/ADR细胞、COC1细胞、LTEP-a-2细胞、TE-11细胞、CCC-HIE-2细胞、CCC-HBE-2细胞、ZR-75-30细胞、293T细胞、3T3-L1细胞、AsPC-1细胞、Bcap-37细胞、Bel-7402细胞、Bel-7404细胞、BGC-823细胞、BHK-21细胞、BxPC-3细胞、Caco-2细胞、COLO-205细胞、CTLL-2细胞、GLC-82细胞、Hep G2细胞、HIT-T15细胞、HSC-T6细胞、HuH-7细胞、MLTC-1细胞、NG108-15细胞、P815细胞、PC-12细胞、SF9细胞、RGC-5细胞、Tca8113细胞、B16-F10细胞、HO8910细胞、OVCA433细胞、16HBE细胞、Bel-7405细胞、EA.hy926细胞、Eca-109细胞、HCT-8细胞、HK-2细胞、KMB-17细胞、MRC-5细胞、WB-F344细胞、QGY-7703细胞、SRSV/3T3细胞、TF-1细胞。

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