用途概述:
免疫组化试剂盒用于体外诊断。Histostain®-Plus试剂盒用于检测与人体组织或细胞标本。适用范围为冰冻切片和石蜡包埋组织切片,新准备好的淋巴细胞,和固定的培养细胞。
检测原理:
早在1987年 Zymed 公司引入Histostain®-SP 检测试剂盒。LAB-SA (也叫做链亲和素-生物素放大体系)被*为是免疫组化的监测方法。LAB-SA的方法学已经在基础研究和平常的试验中广泛应用。
试验原理
被石蜡包埋的组织切片在二甲苯中脱去石蜡并逐级水化后,进行内源性的过氧化物酶淬灭。内源性过氧化物酶可以被甲醇或Zymed's Peroxo-Block (目录号:00-2115)中的3%的过氧化氢所抑制。 说明:非免疫血清用来去除非特异性背景。孵育一抗后,加入二抗,再经过一步冲洗,加入链霉亲和素过氧化物酶藕联物。
6大特点
1.简易:以简单的一步反应取代常规法的五个步骤。 2.快捷:以1个小时取代常规法的3-5 个小时。 3.通用:适合于绝大多数一级抗体,而且不需要二级抗体反应。 4.灵敏:具有与常规法相似的灵敏度。 5.重现性好:实验结果重现性好。 6.经济:抗体和试剂可重复使用 4-5次。
一般包括:1、特异性的一抗 2、免疫组化检测系统。但有的同时还具备3、显色系统。不同的公司内容有差别。所以你购买时一定了解清楚:1、一抗是做人的还是兔、鼠的组织,是否适合你需要?2、检测系统是ABC?SP?非生物素?其他?3、试剂盒的内容都有什么?有没有显色系统?4、如果没有,自己根据前面的检测系统需配那个显色系统?(其他的辅助试剂如PBS缓冲液、抗原修复液等一般另卖或自配) 免疫组化抗体即指特异性一抗,是你想用来标记的指标,免疫组化过程的其他试剂一律另外配备。 另外:根据经验,现在公司太多,网上的,上门推销的等等,质量良莠不齐。试剂很贵,学生经费有限,订货时谨慎。做实验时,如遇出结果困难,记得做阳性片对照,要敢于怀疑检测系统或显色系统的问题。当然,对于学生的操作水平我也不敢恭维,到病理科好好向老师多请教才是。
SABC试剂盒
SABC(Strept Avidin-Biotin Complex)法是一种显示组织和细胞中抗原分布的简便而敏感的免疫组化染色方法。在实际实验过程中,其比直接酶标二抗敏感5-10倍,是免疫组化的理想方法。 基本原理: SABC是链霉亲和素-生物素-酶(或者FITC)复合物。 亲和素(Avidin)存在于鸡蛋中,分子量67001,是一种碱性蛋白。对生物素有很强的结合力。链霉亲和素是从链霉菌中提取的一种蛋白质,分子量47000,等电点为6.0-6.5,也对生物素有很强的结合力,但其等电点接近中性,明显消除了原碱性蛋白所引起的非特异性吸附。 生物素活化后,可以标记抗体和酶而不影响其活性。再经SABC放大,一分子的抗体可以结合几十分子的酶或者荧光素,从而有很强的放大作用。 为了与一抗更好的配合,为了大家实验的方便,索莱宝公司特进口分装国外的SABC试剂盒,其包括过氧化物酶,碱性磷酸酶和FITC三大系列,配以其他相关试剂,可以满足大部分免疫组化的工作需要。 SABC试剂盒可按一抗种属来源(小鼠、兔、山羊)和显色方法(DAB、BCIP/NBT、FITC)来分。
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