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DNA提取试剂盒的简介和保存
更新时间:2014-05-14   点击次数:323次

DNA提取试剂盒主要可以分为以下几大类:小量全血基因组DNA提取试剂盒、中量全血基因组DNA提取试剂盒、组织/细胞基因组DNA提取试剂盒、中量/大量组织/细胞基因组DNA提取试剂盒、全血/组织/细胞基因组DNA提取试剂盒、CTAB植物基因DNA提取试剂盒、新型植物基因组DNA提取试剂盒、酵母基因组DNA提取试剂盒、M13噬菌体单链基因组DNA提取试剂盒。

DNA提取试剂盒是根据氯化芐法构建的,能够从样本中提取基因组DNA的试剂盒。

保存方法:

室温。低温保存可能会有沉淀析出。如果发生析出现象,请于50℃溶解后,再于室温保存。

举例展示保存方法一

【从全血中提取基因组DNA】

① 取10~250 μl的全血(含抗凝剂)加入至Collection Tube中。

② 加入500 μl的Solution A。

③ 加入1 μl的RNase A1,激烈振荡15秒钟后,冰浴5分钟。

注) 人与动物的抗凝全血的一次处理量为≤250 μl;禽类、两栖类的抗凝全血的一次处理量为≤10 μl。

 

举例展示保存方法二

(一).使用悬浮培养的动物细胞时:

① 使用Collection Tube收集1×105~1.5×107的细胞悬浮液,5,000 rpm离心5分钟,弃上清(细胞培养液)。

② 加入150 μl的灭菌蒸馏水或PBS悬浮细胞。

③ 加入500 μl的Solution A和0.8 μl的RNase A1,激烈振荡15秒钟,然后室温静置1分钟。

 

(二).使用贴壁细胞时:

① 弃尽培养液,向培养皿中加入650 μl的Solution A,室温静置1分钟。

注)96孔板等的每个孔中一次容纳不了650 μl 溶液时,请分数次处理细胞。

② 用移液枪的枪头吹落贴壁培养细胞,取650 μl的细胞悬浮液转移至Collection Tube中。

③ 加入0.8 μl的RNase A1,激烈振荡15秒钟,然后室温静置1分钟。

2. 加入400 μl的Solution B,振荡混合。

3. 加入1 ml的4℃预冷的Solution C,充分混匀后,12,000 rpm离心2分钟。

4. 弃去上层有机相,再加入1 ml的4℃预冷的Solution C,充分混匀后,12,000 rpm离心2分钟。

5. 弃去上层有机相,然后将水相溶液(无色下层)转移至置于Collection Tube上的Filter Cup中,12,000 rpm离心1分钟。

注)有机相(上层)带有颜色,请务必除尽,否则会阻碍DNA结合到DNA制备膜上。相间沉淀不必考虑,在过滤时将被去除。

6. 弃Filter Cup,在滤液中加入400 μl的DB Buffer,混合均匀。

7. 将试剂盒中的Spin Column安置于Collection Tube上。将上述操作6混合溶液转移至Spin Column中,12,000 rpm离心1分钟,弃滤液。

8. 将500 μl的Rinse A加入至Spin Column中,12,000 rpm离心30秒钟,弃滤液。

9. 将700 μl的Rinse B加入至Spin Column中,12,000 rpm离心30秒钟,弃滤液。

注)请沿Spin Column管壁四周加入Rinse B,这样有助于*冲洗沾附于管壁上的盐份。

10. 重复操作步骤9。

11. 将Spin Column安置于新的1.5 ml的离心管上,在Spin Column膜的中央处加入50~200 μl的灭菌蒸馏水或Elution Buffer,室温静置1分钟。

注)把灭菌蒸馏水或Elution Buffer加热至65℃使用时有利于提高洗脱效率。

12. 12, 000 rpm离心1分钟洗脱DNA。

如果实验室备有适合于Spin Column接口的负压装置,可从上述操作步骤6完成以后进行以下操作。

7. 将试剂盒中的Spin Column插到负压装置的插口上,将上述操作步骤6的混合溶液转移到Spin Column中,开启调节负压装置,缓慢吸走Spin Column中的溶液(流速控制在1滴/秒)。

8. 将负压调至zui大,向Spin Column中加入500 μl的Rinse A,吸尽Spin Column中溶液。

9. 向Spin Column中加入700 μl的Rinse B,吸尽Spin Column中溶液。

注)请沿Spin Column管壁四周加入Rinse B,这样有助于*冲洗沾附于管壁上的盐份。

10. 重复操作步骤9。然后从负压装置上取下Spin Column,将其安置于试剂盒中的Collection Tube上,12, 000 rpm离心1分钟。

11. 将Spin Column安置于新的1.5 ml的离心管上,在Spin Column膜的中央处加入50~200 μl的灭菌蒸馏水或Elution Buffer,室温静置1分钟。

注)把灭菌蒸馏水或Elution Buffer加热至65℃使用时有利于提高洗脱效率。

12. 12, 000 rpm离心1分钟洗脱DNA。

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