ATCC ,ICLC细胞生长与增殖

    培养细胞的生存环境是培养瓶、器皿或其他容器，生存空间及营养是有限的。当细胞增殖到一定密度后，分离出一部分细胞和更新营养液，使细胞更好地生存，这一过程称之为“ 传代”（passage或subculture）。 值得注意的是：每次传代细胞在生长和增殖方面受到一定的影响

细胞生命期（life span of culture cells）

　　指细胞在培养过程中持续增殖和生长的时间。一般根据细胞种类、性状和原供体的年龄的情况而定。

　　如：二倍体成纤维细胞，在不冻存和反复传代条件下可传30～50代，相当于150～300个细胞增殖周期，能维持一年左右的生命，细胞便开始凋亡（apoptosis）。 细胞在生存过程中经历以下三个阶段

　1.原代培养期（primary culture）

　　组织到*次传代 时间大约为1～4周  细胞培养

　　特点：

　　细胞活跃移动,分裂,但不旺盛多呈二倍体核型。

　　原代与体内原组织形态结构和功能活动基本相似。

　　各细胞的遗传性状互不相关，细胞相互依存性强，如果把这种稀释分散成单细胞,在软琼脂培养基中进行培养细胞克隆的形成率（cloning efficiency）下降，表明细胞独立生存性差。

　2.传代期（passage）

　　初代培养细胞一经传代便称之为细胞系（cell line）

　　特点：

　　细胞增殖旺盛，并维持二倍体核型，也叫二倍体细胞系（diploid cell line）为了保存二倍体细胞性质，细胞应在初代或传代早期冻存为好。

　　一般细胞在10代以内冻存。

　　冻存配方：

　　向培养液加入保护剂二甲基亚砜（DMSO）或甘油,封入安瓶中。

　　存于在液氮中温度可达到－196℃，可长期储存。如解冻后细胞复苏，仍能继续增殖生长，细胞性状不受影响，成为保存细胞zui主要的手段。

　3.衰退期

　　特点：细胞仍生存 增殖减慢 不增殖 轮廓增强 衰退凋亡

　　注意：细胞在三期中的任何一期（一般发生在传代后期或衰退期）在某些因素影响下,如血清质量不佳、病毒污染、温度和pH不稳等,细胞可能发生自发转化（spontaneous transformation）;

　　细胞可能获得永生性（immortality） 或称为恶性性（malignancy）。细胞获得持久性的增殖能力,这样的细胞群体称为连续细胞系（continuous cell line）。而细胞获得不死性后,细胞核型大多变成异倍体（heteroploid）接触抑制消失。

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