人松弛素H2（Relaxin H2）ELISA试剂盒

人松弛素H2(Relaxin H2)ELISA试剂盒

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人松弛素H2(Relaxin H2)ELISA试剂盒说明书
人松弛素H2(Relaxin H2)ELISA试剂盒
原理:本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗人 Relaxin H2 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 Relaxin H2与单抗结合，加入生物素化的抗人Relaxin H2，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，在450nm处测OD值，Relaxin H2浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中Relaxin H2浓度。
试剂盒组成(2-8℃保存)
酶标板(Coated Wells)96孔
酶标抗体工作液(Enzyme Conjugate)12ml
10×标本稀释液(Sample Buffer)12ml
20×浓缩洗涤液(Wash Buffer)50ml
标准品(Standards)：0.6ng/瓶
2瓶底物工作液(TMB Solution)12ml
*抗体工作液(Biotinylated Antibody)12ml
终止液(Stop Solution)12ml
准备试剂与收集血样:
1. 收集标本：血清、血浆(EDTA、肝素抗凝)、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻(-20 ℃或-70 ℃)保存，避免反复冻融。正常标本测定前用标本稀释液作1：20稀释(取10ul，加标本稀释液190ul,稀释20倍)。
2. 标准品液配制：使用前加入0.3ml蒸馏水混匀，配成2000pg/ml的溶液。设标准管8管，每管加入标本稀释液300ul。在*管中加入2000pg/ml的标准品溶液300ul混匀后用加样器吸出300ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出300ul弃去。第八管为空白对照。
3. 10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释(示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水)。
4. 洗涤液：用重蒸水1:20稀释(示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水)
检测程序:
1. 加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。
2. 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。
3. 每孔中加入*抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。
4. 洗板：同前。
5. 每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。
6. 洗板：同前。
7. 每孔加入底物工作液100ul，置37 ℃暗处反应15分钟。
8. 每孔加入100ul终止液混匀。
9. 30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。
结果计算与判断:
1. 所有OD值都应减除空白值后再行计算。
2. 以标准品1000、500、250、125、62、31、15.6、0 PG/ml为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。
3. 根据样品OD值在该曲线图上查出相应Relaxin H2含量，再乘上稀释倍数即可。
试剂盒性能:
1. 灵敏度：zui小的Relaxin H2 检测浓度小于8pg/ml。
2. 特异性：可同时检测重组或天然的人Relaxin H2。不与人其它细胞因子有交叉反应。
3. 重复性：板内、板见变异系数均小于10％。
注意事项:
1. 以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。
2. 洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致度误差及OD值错误地升高。
3. 板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。
4. 本试剂盒宜置4oC冰箱保存。
5. 本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！

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