小鼠组织蛋白去乙酰化酶（HD）ELISA试剂盒

小鼠组织蛋白去乙酰化酶(HD)ELISA试剂盒

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小鼠组织蛋白去乙酰化酶(HD)ELISA试剂盒说明书

小鼠组织蛋白去乙酰化酶(HD)ELISA试剂盒仅供研究使用

检测范围：2.4 pg/ml - 600 pg/ml

预期应用：ELISA法定量测定小鼠血清或其它相关生物液体中HD含量。

特异性：本试剂盒可检测小鼠HD，且与其他相关蛋白无交叉反应。

说明 

1．试剂盒保存：-20℃(较长时间不用时)；2-8℃(频繁使用时)。

2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。 

3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。

4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。

实验原理:用纯化的羊抗小鼠包被微孔板，制成固相载体，然后向微孔中依次加入标本或标准品、HRP标记的HD以及抗HD抗体，经过*洗涤后用底物溶液显色。底物在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的HD呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，计算样品浓度。 

小鼠组织蛋白去乙酰化酶(HD)ELISA试剂盒组成及试剂配制 

1. 酶联板(Assay plate )：一块(96孔)。 

2. 标准品(Standard)：5×0.5 ml/瓶。

标准品 S1 S2 S3 S4 S5

浓度

(pg/ml) 2.4 9.3 37.5 150 600

3. 酶结合物(HRP-Conjugate)：1×6 ml/瓶。

4. 抗体(Antibody)：1×6 ml/瓶

5. 底物溶液A(Substrate A)：1×7ml/瓶。

6. 底物溶液B(Substrate B)：1×7ml/瓶。

7. 浓洗涤液(Wash Buffer)：1×15ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释20倍。 

8. 终止液(Stop Solution)：1×10ml/瓶(2N H2SO4)。

需要而未提供的试剂和器材

1. 标准规格酶标仪

2. 高速离心机

3. 干净的试管和Eppendof管

4. 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，用多通道移液器

5. 电热恒温培养箱

6. 蒸馏水，容量瓶等

标本的采集及保存 

血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃一夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

注：标本溶血会影响zui后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

标本的稀释原则：

首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。zui后计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。

操作步骤

实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用**行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。

1. 加样：设一个空白对照孔，不加任何溶液。余孔分别加标准品或待测样品50μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁。

2. 每孔加酶结合物 50μl和抗体50μl，空白孔不加。充分混匀，37℃温育1小时。

3. 温育后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，200μl/每孔，甩干。

4. 依序每孔加底物溶液A和B各50μl，37℃避光显色15分钟内。

5. 依序每孔加终止溶液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

6. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。 在加终止液后15分钟以内进行检测。

注：

1. 用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。

2. 每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是zui后加底物溶液及2N H2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。 

3. 为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。

4. 建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。

洗板方法

1.自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

2.手工洗板方法：吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。

计算:以标准物的浓度为横坐标(对数坐标)，OD值为纵坐标(普通坐标)，在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 

注意事项

1. 当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。

2. 洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。

3. 一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4. 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。

5. 如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请zui后乘以稀释倍数。

6. 底物请避光保存。

7. 不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。

有效期：6个月

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