人转铁蛋白（TRF）Elisa试剂盒使用说明书

人转铁蛋白（TRF）Elisa试剂盒仅供研究使用。

检测范围：96T  20μmol/L -650μmol/L

使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中转铁蛋白（TRF）含量。

实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人转铁蛋白（TRF）水平。用纯化的人转铁蛋白（TRF）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入转铁蛋白（TRF），再与HRP 标记的转铁蛋白（TRF）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的转铁蛋白（TRF）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人转铁蛋白（TRF）浓度。

人转铁蛋白（TRF）Elisa试剂盒组成:

1 30 倍浓缩洗涤液20ml×1 瓶7 终止液6ml×1 瓶

2 酶标试剂6ml×1 瓶8 标准品（1200μmol/L） 0.5ml×1 瓶

3 酶标包被板12 孔×8 条9 标准品稀释液1.5ml×1 瓶

4 样品稀释液6ml×1 瓶10 说明书1 份

5 显色剂A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 张

6 显色剂B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 个

标本要求:

1.不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

2.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

操作步骤:

1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

600μmol/L 5 号标准品150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液

300μmol/L 4 号标准品150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液

150μmol/L 3 号标准品150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液

75μmol/L 2 号标准品150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液

37.5μmol/L 1 号标准品150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。

4.配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟.

10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15 分钟以内进行。

计算:以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

注意事项:

1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4.请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔*孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6.底物请避光保存。

7.严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9.本试剂不同批号组分不得混用。

10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

保存条件及有效期:

1.试剂盒保存：2-8℃。

2.有效期：6个月