乾思 生物编辑整理： 教 师：XXX 实验类型：基础 学　　时：8 （参考） 内　　容： 一、实验目的： 1.以检测IL－2为例，使学生掌握一定的细胞培养技术。 2.使学生掌握一定的细胞因子检测的一些主要方法。 3.掌握免疫细胞分离的主要技术和方法。 二、实验原理： 检测细胞因子对于阐明机体免疫应答机制及相关疾病的发生、发展规律和临床治疗都有重要意义。细胞因子的检测主要分为免疫学、生物学和分子生物学三种检测方法。 生物学方法检测细胞因子活性，其原理时根据细胞因子对特定的依赖性细胞株（即靶细胞）的促增值作用，以增值细胞中的DNA合成或者酶活性作为指标，间接推算出细胞因子的生物学活性。 三、试剂与器材： 10％FCS－RPMI－1640培养液，刀豆蛋白A（ConA），3H－TdR，C57BL小鼠，IL－2标准品，PHA。 离心机、超净台、分光光度仪、细胞培养板等。 四、操作方法： 1.人外周血T细胞PBMC分离 2.PHA刺激产生IL－2 3.离心去沉淀回收上清 4.IL－2活性测定 5.CTLL－2细胞株培养 6.MTT掺入 7.测OD值570nm 8.结果分析 五、关键步骤与注意事项： 1.CTLL－2细胞存活率应大于95％。 2.因标本中含IL－4等，可影响TL－2的测定，采用抗IL－4 mAb吸附剂出去IL－4。 3.整个操作过程中应该注意无菌操作。 4.细胞培养时要做复孔并设阴、阳性对照。 六、思考题： 1.诱导产生IL－2时需要注意哪些方面？ 2.IL－4会对IL－2的测定产生影响，应如何消除？ 3.PHA诱导产生IL－2的机理是什么？

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